ANÁLISE ESTRUTURAL E FUNCIONAL DAS MUTEÍNAS Y126A E Y126F DA PROTEÍNA DE RESISTÊNCIA A HIDROPERÓXIDOS ORGÂNICOS (OHR) DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA

Rayssa Roberta Goncalves E Muzi; Diogo de Abreu Meireles

Título do Trabalho

Autores

Rayssa Roberta Goncalves E Muzi
Diogo de Abreu Meireles

Modalidade

Resumo

Área temática

Eixo Temático 2 - Fome zero, Saúde e Bem-estar

Data de Publicação

09/09/2024

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/xvi-confict-ix-conpg-445276/845816-analise-estrutural-e-funcional-das-muteinas-y126a-e-y126f-da-proteina-de-resistencia-a-hidroperoxidos-organicos-(

ISBN

978-65-272-0687-3

Palavras-Chave

Tiol perioxidases, Organic hydroperoxide resistance protein, Mutação sítio dirigida

Resumo

A descoberta de uma nova família de tiol peroxidases, chamada de Ohr (Organic hydroperoxide resistance protein), trouxe uma importante contribuição na compreensão dos sistemas de detoxificação de hidroperóxidos orgânicos de bactérias. Ohr apresenta uma notável eficiência catalítica na redução de hidroperóxidos orgânicos (~ 10^6 - 10^7 M-1 s-1), porém seu papel fisiológico ainda não é completamente compreendido, e poucos estudos estão dedicados a investigar os fatores responsáveis por esta alta eficiência. Análise por alinhamento múltiplo, combinada com observação estrutural, revelou a presença de um resíduo de tirosina 126 (Y126) altamente conservado em seu sítio ativo. Estrategicamente posicionado, seu grupo hidroxila do anel aromático interage com resíduos sabidamente envolvidos com sua atividade catalítica. Neste projeto, daremos continuidade à investigação do papel funcional e estrutural do resíduo da tirosina Y126 utilizando como modelo a proteína Ohr de P. aeruginosa. Obtivemos, por mutação sítio dirigida, muteínas de Ohr que carregam substituição da tirosina por um resíduo de alanina (Y126A) ou fenilalanina (Y126F). Os resultados prévios mostraram que a substituição deste resíduo tem impacto de 80 % (Y126A) e 40 % (Y126F) na sua atividade catalítica, indicando que tanto a função fenol quanto a hidroxila deste resíduo parecem ser importantes para catálise. Efetuamos a otimização das condições de expressão da proteína Ohr selvagem e das muteínas Y126A e Y126F no LFBM e estamos otimizando um protocolo de expressão por autoindução. Após a purificação, as mutações serão analisadas quanto à estabilidade e propriedades termodinâmicas por meio de técnicas bioquímicas e biofísicas como SDS-PAGE não redutor, dicroísmo circular na região UV próximo (240 - 320 nm) e calorimetria diferencial de varredura (nanoDSC), em comparação com a proteína selvagem. Esses dados ajudarão a compreender a evolução e os mecanismos de detoxificação das enzimas, potencialmente impulsionando o desenvolvimento de inibidores enzimáticos e a otimização de suas propriedades.

Título do Evento: XVI CONFICT / IX CONPG
Cidade do Evento: Campos dos Goytacazes
Título dos Anais do Evento: Anais do XVI Congresso de Iniciação Científica e Tecnológica e IX Congresso Fluminense de Pós-Graduação
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

MUZI, Rayssa Roberta Goncalves E; MEIRELES, Diogo de Abreu. ANÁLISE ESTRUTURAL E FUNCIONAL DAS MUTEÍNAS Y126A E Y126F DA PROTEÍNA DE RESISTÊNCIA A HIDROPERÓXIDOS ORGÂNICOS (OHR) DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA.. In: Anais do XVI Congresso de Iniciação Científica e Tecnológica e IX Congresso Fluminense de Pós-Graduação. Anais...Campos dos Goytacazes(RJ) UENF, 2024. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/xvi-confict-ix-conpg-445276/845816-ANALISE-ESTRUTURAL-E-FUNCIONAL-DAS-MUTEINAS-Y126A-E-Y126F-DA-PROTEINA-DE-RESISTENCIA-A-HIDROPEROXIDOS-ORGANICOS-(. Acesso em: 16/05/2025