ENGENHARIA DE ANTICORPOS TERAPÊUTICOS ANTI-HCD73 PARA TRATAMENTO DE LEUCEMIA LINFOIDE AGUDA E OUTRAS MALIGNIDADES

Gabriella Lima dos Reis; Letícia Grillo Guimarães Pereira; Rhaissa Godoi; Mayara Ferreira Euzébio; Priscila Pini Zenatti

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Trabalho

Título do Trabalho

ENGENHARIA DE ANTICORPOS TERAPÊUTICOS ANTI-HCD73 PARA TRATAMENTO DE LEUCEMIA LINFOIDE AGUDA E OUTRAS MALIGNIDADES

Autores

Gabriella Lima dos Reis
Letícia Grillo Guimarães Pereira
Rhaissa Godoi
Mayara Ferreira Euzébio
Priscila Pini Zenatti

Modalidade

Apresentação de Trabalhos

Área temática

Molecular

Data de Publicação

25/04/2022

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/xvcaeb/440123-engenharia-de-anticorpos-terapeuticos-anti-hcd73-para-tratamento-de-leucemia-linfoide-aguda-e-outras-malignidades

ISBN

978-65-5941-648-6

Palavras-Chave

anti-hCD73, imunoterapia, leucemia linfoide aguda

Resumo

A ecto-5'-nucleotidase (CD73) é uma enzima que tem a capacidade de hidrolisar AMP em adenosina, um potente imunossupressor. Este antígeno de membrana é um marcador molecular para um subgrupo de leucemia linfoide aguda do tipo B (LLA-B), Philadelphia-like, que ocorre em cerca de 10% das crianças e tem altas taxas de recaída pós-tratamento. Logo, a CD73 se mostra um excelente alvo para o desenvolvimento de imunoterapias específicas contra a LLA. Dessa forma, esse projeto consistiu na construção, produção e caracterização da versão quimérica (cCD73#7) de um anti-CD73 murino obtido em nosso laboratório, além da construção e produção do anticorpo humano MEDI9447 (oleclumab), já em fase de testes clínicos, a partir das sequências variáveis leve (V?) e pesada (V?) obtidas da literatura. As sequências variáveis leve (V? e V?) e pesada (V?) de ambos anticorpos foram sintetizadas e clonadas nos plasmídeos pUC19? ou ?, em frame com a porção constante leve humana, e pUC19?1, em frame com a porção constante pesada humana, respectivamente. A produção in vitro dos anticorpos foi realizada por meio de transfecção em HEK293T com os respectivos plasmídeos, a confirmação da produção foi feita por SDS-PAGE, a sensibilidade foi verificada por ELISA, e a especificidade foi avaliada por Western Blotting (WB) e Citometria de Fluxo. O cCD73#7 se ligou à proteína recombinante hCD73-GST no ensaio de ELISA e também no teste de WB. Mas foi inespecífico quando testado contra lisado celular da linhagem DAOY, por WB. Para validar a capacidade de reconhecer a proteína hCD73 em sua conformação natural, ambos anticorpos, cCD73#7 e MEDI9447, foram testados por citometria de fluxo contra células da linhagem DAOY (expressão endógena da CD73), bem como células da linhagem REH com expressão ectópica da hCD73 (REH-NT5E). O resultado foi negativo para cCD73#7 e positivo para MEDI9447, sugerindo que o epítopo reconhecido pelo anticorpo quimérico está acessível na proteína recombinante, mas está escondido ou bloqueado na conformação natural da hCD73. Já o epítopo reconhecido pelo MEDI9447 está acessível na condição in natura. Portanto, conclui-se que a metodologia de produção dos anticorpos foi bem sucedida, e novos estudos serão necessários para identificar o epítopo de ligação do cCD73#7. O MEDI9447 servirá para confirmar se o antígeno CD73 representa, de fato, um alvo terapêutico contra a LLA. Isso é necessário porque até o momento, não há dados sobre o efeito terapêutico de um anti-CD73 na LLA.

Título do Evento: XV CAEB
Título dos Anais do Evento: Anais do XV Congresso Aberto aos Estudantes de Biologia
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

REIS, Gabriella Lima dos et al.. ENGENHARIA DE ANTICORPOS TERAPÊUTICOS ANTI-HCD73 PARA TRATAMENTO DE LEUCEMIA LINFOIDE AGUDA E OUTRAS MALIGNIDADES.. In: Anais do XV Congresso Aberto aos Estudantes de Biologia. Anais...Campinas(SP) UNICAMP, 2022. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/XVCAEB/440123-ENGENHARIA-DE-ANTICORPOS-TERAPEUTICOS-ANTI-HCD73-PARA-TRATAMENTO-DE-LEUCEMIA-LINFOIDE-AGUDA-E-OUTRAS-MALIGNIDADES. Acesso em: 21/05/2025