RT-PCR EM TEMPO REAL LN34 PAN-LYSSAVIRUS PARA DETECÇÃO DO VÍRUS DA RAIVA: RESULTADOS PRELIMINARES

Fabiano Sobral Colaro; Pedro Pereira Ribeiro; Lucas Xavier Florenço; Daniela Dutra De Oliveira; Lohanna Peres de Castro Ribeiro; Cristiane Divan Baldani; Huarrisson Azevedo Santos; Juliana Macedo Raimundo

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Trabalho

Título do Trabalho

RT-PCR EM TEMPO REAL LN34 PAN-LYSSAVIRUS PARA DETECÇÃO DO VÍRUS DA RAIVA: RESULTADOS PRELIMINARES

Autores

Fabiano Sobral Colaro
Pedro Pereira Ribeiro
Lucas Xavier Florenço
Daniela Dutra De Oliveira
Lohanna Peres de Castro Ribeiro
Cristiane Divan Baldani
Huarrisson Azevedo Santos
Juliana Macedo Raimundo

Modalidade

Resumo

Área temática

Ciências Agrárias - Medicina Veterinária

Data de Publicação

22/04/2025

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/xi-raic-e-v-raidtec-ufrrj/943325-rt-pcr-em-tempo-real-ln34-pan-lyssavirus-para-deteccao-do-virus-da-raiva--resultados-preliminares

ISBN

978-65-272-1295-9

Palavras-Chave

Biologia molecular, Vírus da raiva, Saúde pública.

Resumo

A raiva é uma zoonose viral aguda que ainda constitui desafio à saúde pública dada a severidade das manifestações clínicas, elevada letalidade e custos decorrentes dos tratamentos pré e pós-exposição. Trata-se de uma doença de notificação compulsória, e que, apesar da existência da vacina antirrábica há mais de um século, a doença persiste de forma endêmica sendo responsável por milhares de óbitos humanos anualmente. A organização mundial da saúde recomenda que sejam realizados dois testes para o diagnóstico da raiva, a imunofluorescência direta - técnica padrão-ouro - e o isolamento viral como teste confirmatório. A raiva apresenta alta letalidade, portanto, se faz necessária a implementação de técnicas confirmatórias sensíveis, específicas, rápidas e acuradas. Neste sentido, ensaios moleculares como a transcrição reversa seguida de reação em cadeia de polimerase quantitativa (RT-qPCR) tem ganhado destaque como alternativa à prova biológica no diagnóstico da raiva devido às preocupações éticas e de bem-estar animal, menor custo e rapidez nos resultados. Este estudo visa avaliar a efetividade do ensaio LN34 Pan-Lyssavirus RT-qPCR no diagnóstico confirmatório da raiva em amostras oriundas do Programa Estadual de Vigilância da Raiva Amostras de tecido encefálico de cães, carnívoros silvestres e espécies de morcegos não hematófagos considerados suspeitos de infecção pelo vírus da raiva, provenientes de diferentes municípios do estado do Rio de Janeiro, foram colhidas de forma asséptica e acondicionadas em microtubos estéreis devidamente identificados e mantidos a -20°C. Para a extração do RNA total, aproximadamente 50mg do tecido foram macerados em microtubos contendo 500µL de água ultrapura e esferas de vidro utilizando um agitador à velocidade máxima por 10 minutos. A partir de 200µL desta suspensão, o material genético é extraído utilizando Trizol, de acordo com as instruções do fabricante. Para ampliar e detectar a sequência leader 3’ que é conservada entre as espécies do gênero Lyssavirus será utilizado o protocolo LN34 Lyssavirus desenvolvido por Wadhwa e colaboradores (2017). As reações serão realizadas no termociclador StepOnePlus Real-Time PCR System (Applied Biosystems). Visando assegurar o controle da qualidade do teste, são utilizados como controle positivo o vírus fixo, cepa CVS 38; como controle negativo, água ultra-pura (invitrogen), e como controle endógeno a beta-actina. Até o presente momento foram obtidas 20 amostras positivas para o vírus da raiva oriundas Programa Estadual de Vigilância da Raiva do estado do Rio de Janeiro, sendo cães (n=2), morcegos não hematófagos (n=11), porco do mato (n=1), lhama (n=1), sagui (n=1), bovinos (n=2) e equinos (n=2). O processo de extração utilizando o protocolo supracitado tem se mostrado eficaz, dada a concentração média de RNA obtido por amostra (±60ng/µL) e às razões de pureza de extração (A260/280nm; A260/A230nm) que indicam ausência ou baixíssima concentração de fenol, proteínas e contaminantes. Trata-se de estudo preliminar ainda em execução. Espera-se que os resultados, no que concerne às perspectivas de inovação e desenvolvimento tecnológico, possam respaldar o uso do ensaio molecular de RT-qPCR como técnica confirmatória alternativa ao uso de animais na prova de isolamento viral no laboratório de referência estadual no diagnóstico da raiva. WADHWA, Ashutosh et al. A Pan-Lyssavirus Taqman Real-Time RT-PCR Assay for the Detection of Highly Variable Rabies virus and Other Lyssaviruses. PLoS neglected tropical diseases. Atlanta, vol. 11, 12 jan. 2017. DOI:10.1371/journal.pntd.0005258. Disponível em: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28081126/. Acesso em: 21 set. 2024.

Título do Evento: XI Reunião Anual de Iniciação Científica da UFRRJ (RAIC 2024) & V Reunião Anual de Iniciação em Desenvolvimento Tecnológico e Inovação (RAIDTec 2024)
Cidade do Evento: Seropédica
Título dos Anais do Evento: Anais da XI Reunião Anual de Iniciação Científica da UFRRJ (RAIC) e V Reunião Anual de Iniciação em Desenvolvimento Tecnológico e Inovação (RAIDTec): Transição energética: impactos ambientais e sociais
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

COLARO, Fabiano Sobral et al.. RT-PCR EM TEMPO REAL LN34 PAN-LYSSAVIRUS PARA DETECÇÃO DO VÍRUS DA RAIVA: RESULTADOS PRELIMINARES.. In: Anais da XI Reunião Anual de Iniciação Científica da UFRRJ (RAIC) e V Reunião Anual de Iniciação em Desenvolvimento Tecnológico e Inovação (RAIDTec): Transição energética: impactos ambientais e sociais. Anais...Seropédica(RJ) UFRRJ, 2024. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/xi-raic-e-v-raidtec-ufrrj/943325-RT-PCR-EM-TEMPO-REAL-LN34-PAN-LYSSAVIRUS-PARA-DETECCAO-DO-VIRUS-DA-RAIVA--RESULTADOS-PRELIMINARES. Acesso em: 10/07/2025