EXAMES LABORATORIAIS PARA O DIAGNÓSTICO HEMATOLÓGICO, MORFOLÓGICO E MOLECULAR DE HEMOSPORÍDEOS EM AVES SILVESTRES

Luana Spinozzi Di Lelli; Renan Rezende Afonso; Thainá Rodrigues Fernandes; Flávia Guimarães Chaves; Alexandre Carvalho Costa; Naiara Vidal Stocco; Cristiane Divan Baldani; Andresa Guimarães

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Trabalho

Título do Trabalho

EXAMES LABORATORIAIS PARA O DIAGNÓSTICO HEMATOLÓGICO, MORFOLÓGICO E MOLECULAR DE HEMOSPORÍDEOS EM AVES SILVESTRES

Autores

Luana Spinozzi Di Lelli
Renan Rezende Afonso
Thainá Rodrigues Fernandes
Flávia Guimarães Chaves
Alexandre Carvalho Costa
Naiara Vidal Stocco
Cristiane Divan Baldani
Andresa Guimarães

Modalidade

Resumo

Área temática

Ciências Agrárias - Medicina Veterinária

Data de Publicação

22/04/2025

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/xi-raic-e-v-raidtec-ufrrj/943184-exames-laboratoriais-para-o-diagnostico-hematologico-morfologico-e-molecular-de-hemosporideos-em-aves-silvestres

ISBN

978-65-272-1295-9

Palavras-Chave

Diagnóstico laboratorial, sanidade avícola, zoonose

Resumo

As aves possuem grande importância nos ecossistemas por serem consideradas bioindicadores quando são suscetíveis às condições do ambiente, sendo essenciais para monitorar a condição ambiental. Na medicina de animais selvagens, especialmente das aves, os exames laboratoriais são indicados como apoio para diagnóstico, monitoramento e prevenção de doenças, além de servirem como biomarcadores de impacto ambiental. O presente estudo tem como objetivo realizar a avaliação hematológica por pesquisa de hemosporídeos (<Plasmodium> spp./<Haemoproteus> spp.) em aves, amostradas no Instituto Nacional da Mata Atlântica (INMA) através da detecção direta em microscopia de luz e biologia molecular. Foi realizado exame clínico de rotina das aves e colheita de sangue, via veia jugular direita, de um volume aproximado de 0,5mL a 1mL e feito esfregaços sanguíneos em duplicata sem anticoagulante. O sangue restante foi acondicionado em tubo pediátrico 0,5mL contendo o anticoagulante EDTA e congelado para posterior realização da análise molecular. Os esfregaços sanguíneos foram analisados em microscópio óptico em objetiva de imersão no Laboratório de Patologia Clínica Veterinária (LABVET) da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro. As extrações de DNA foram realizadas com o Extracta® Kit – DNA (Loccus®) e o DNA extraído foi quantificado em Nanodrop® e armazenado a -20°C para posterior realização da análise do gene endógeno e PCR. As análises moleculares foram realizadas no LABVET e no Laboratório de Sanidade Avícola (LASAVE). Todas as amostras foram submetidas a reação de amplificação do gene endógeno Beta actina (ACTB) utilizando primers específicos (B-actin-aveF e B-actin-aveR) e apresentaram banda, sinalizando a presença de DNA de aves. Nas reações de PCR foram utilizados 5µL de DNA e os iniciadores (primers) HaemNF-1 e HaemNR3, seguidos por uma segunda reação (nested) com os primers HaemF e HaemR2 para amplificação de aproximadamente 500 bp do Citocromo b (cytb), seguindo concentrações de reagentes e termociclagem previamente estabelecidos. Os produtos gerados na PCR foram analisados por eletroforese em gel de agarose corado com brometo de etídio e observado sob transiluminador de fluorescência ultravioleta. Um marcador molecular de 100 bp (Invitrogen®) foi incluído em cada eletroforese para a determinação do tamanho dos produtos da PCR amplificados em cada reação. O surgimento de produtos na altura dos pares de bases esperados e comparados com o controle positivo foram considerados como parâmetro para classificar as amostras como positivas. Água ultrapura foi utilizada como controle negativo das reações e o controle positivo utilizado foi uma amostra de sangue de galinha (<Gallus gallus domesticus>) infectada por <Plasmodium> spp. Foram amostradas 30 aves no Instituto Nacional da Mata Atlântica (INMA), pertencentes à ordem Psittaciformes, Piciformes e aves carnívoras. Dentre os animais, 33,3% (n=10/30) apresentaram inclusões sugestivas de hemosporídeos (<Plasmodium> spp./<Haemoproteus> spp.), estes animais eram das espécies <Crax blumenbachii>, <Amazona rhodocorytha>, <Pulsatrix koeniswaldiana> e <Pionus menstruus>. Deles, cinco animais (50%) com inclusões apresentaram alguma alteração no exame clínico. Quanto à PCR, quatro (40%) animais deram positivos com banda na altura esperada. Esses agentes podem acarretar grandes prejuízos econômicos e sérios agravos à saúde, incluindo a morte do hospedeiro e, até extinção de populações susceptíveis. São importantes em aves de diversas espécies que advêm de apreensão do tráfico, ou criação ilegal, e chegam constantemente debilitadas em instituições de reabilitação e de triagem, ficando mais propensas a doenças e a disseminação desses patógenos. Na fase crônica, geralmente subclínica, a intensidade da infecção parece ser influenciada pela complexa interação de hormônios do hospedeiro, podendo persistir por toda a vida das aves infectadas. Dessa forma, é crucial fazer a pesquisa por hemosporídeos em aves silvestres, por meio dos métodos de diagnóstico laboratorial, como a avaliação hematológica e análise biomolecular, para monitorar o cenário epidemiológico dessas afecções em instituições de conservação.

Título do Evento: XI Reunião Anual de Iniciação Científica da UFRRJ (RAIC 2024) & V Reunião Anual de Iniciação em Desenvolvimento Tecnológico e Inovação (RAIDTec 2024)
Cidade do Evento: Seropédica
Título dos Anais do Evento: Anais da XI Reunião Anual de Iniciação Científica da UFRRJ (RAIC) e V Reunião Anual de Iniciação em Desenvolvimento Tecnológico e Inovação (RAIDTec): Transição energética: impactos ambientais e sociais
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

LELLI, Luana Spinozzi Di et al.. EXAMES LABORATORIAIS PARA O DIAGNÓSTICO HEMATOLÓGICO, MORFOLÓGICO E MOLECULAR DE HEMOSPORÍDEOS EM AVES SILVESTRES.. In: Anais da XI Reunião Anual de Iniciação Científica da UFRRJ (RAIC) e V Reunião Anual de Iniciação em Desenvolvimento Tecnológico e Inovação (RAIDTec): Transição energética: impactos ambientais e sociais. Anais...Seropédica(RJ) UFRRJ, 2024. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/xi-raic-e-v-raidtec-ufrrj/943184-EXAMES-LABORATORIAIS-PARA-O-DIAGNOSTICO-HEMATOLOGICO-MORFOLOGICO-E-MOLECULAR-DE-HEMOSPORIDEOS-EM-AVES-SILVESTRES. Acesso em: 28/06/2025