CLONAGEM E EXPRESSÃO HETERÓLOGA DOS GENES HPDE4B EM E. COLI.

Natalia Correa Da Silva; Gabriely Biancamano Gonçalves

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Trabalho

Título do Trabalho

CLONAGEM E EXPRESSÃO HETERÓLOGA DOS GENES HPDE4B EM E. COLI.

Autores

Natalia Correa Da Silva
Gabriely Biancamano Gonçalves

Modalidade

Resumo: SePTI

Área temática

O: Multidisciplinar

Data de Publicação

24/03/2022

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/viiiraic2020/385969-clonagem-e-expressao-heterologa-dos-genes-hpde4b-em-e-coli

ISSN

1809-1342

Palavras-Chave

PDE4B; expressão heteróloga; biotecnologia.

Resumo

Introdução: As fosfodiesterases (PDEs) são enzimas envolvidas em uma variedade de doenças tais como: asma, doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC), doenças neurodegenerativas, depressão, disfunção erétil, infarto do miocárdio, distúrbios metabólicos e dermatológicos. Além disso, recentemente, alguns trabalhos correlacionaram a atuação da PDE na contração e relaxamento do miométrio. Sabe-se que, até o presente momento, a superfamília (PDE1-12) é composta por 12 membros e estes possuem ampla distribuição tecidual com regulação gênica singular e propriedades cinéticas distintas. As PDEs participam de processos de sinalização intracelular através da regulação da concentração citosólica do seu substrato AMPc e/ou GMPc, chamados de segundos mensageiros, hidrolisando-os para 5'AMP e/ou 5'GMP. Um dos integrantes mais estudados da família PDE4 é a PDE4B que é específica para a hidrolise do AMPc. Encontrada em abundância em tecidos como o músculo liso e pulmão a PDE4B é vista como um alvo terapêutico promissor para o tratamento de doenças pulmonares e cardíacas. Consequentemente, vários inibidores de PDE4 foram investigados, como o Rolipram, por exemplo, mas a ocorrência de efeitos colaterais como náusea, vômitos e cefaleia determinou a busca por inibidores mais eficientes e com a menor incidência de efeitos adversos. Objetivo: O presente trabalho teve como objetivo específico a clonagem do gene hPDE4B e a indução da expressão do mesmo gene em bactéria para a produção de proteínas recombinantes. Estas por sua vez serão utilizadas em testes com inibidores sintéticos em um momento futuro. Metodologia: Utilizou-se o vetor de expressão pET-26b com o gene hPDE4B e em seguida, transformou-se a bactéria Escherichia coli cepa BL21 (DE3) pLysS. Por fim, foram realizados ensaios de indução em diferentes condições, previamente determinadas, de crescimento bacteriano e concentrações do indutor. Resultados: Confirmou-se a clonagem do inserto por meio de sequenciamento e através da quantificação indireta dos níveis da proteína de interesse verificou-se níveis satisfatórios de expressão do gene hPDE4B. Conclusão: A clonagem do gene hPDE4B foi realizada com sucesso e o sistema heterólogo demonstrou ser promissor. Futuramente, ensaios de inibição enzimática serão realizados para avaliar os parâmetros cinéticos e a seletividade dos inibidores sintéticos. Referências Bibliográficas McGirr, A., Lipina, T., Mun, HS. Specific Inhibition of Phosphodiesterase-4B Results in Anxiolysis and Facilitates Memory Acquisition. Neuropsychopharmacol. 2016, 41: 1080-1092. TIBBO, Amy J et al. “Understanding PDE4's function in Alzheimer's disease; a target for novel therapeutic approaches.” Biochemical Society transactions vol. 47,5 (2019): 1557-1565. Derek G. Waller, Anthony P. Sampson. 12 - Asthma and chronic obstructive pulmonary disease. Medical Pharmacology and Therapeutic. 2018,193-209.

Título do Evento: VIII Reunião Anual de Iniciação Científica (RAIC 2020) e II Reunião Anual de Iniciação em Inovação e Desenvolvimento Tecnológico (RAIDTec 2020) - UFRRJ
Título dos Anais do Evento: Anais da VIII Reunião Anual de Iniciação Científica (RAIC 2020) e II Reunião Anual de Iniciação em Inovação e Desenvolvimento Tecnológico (RAIDTEC 2020)
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

SILVA, Natalia Correa Da; GONÇALVES, Gabriely Biancamano. CLONAGEM E EXPRESSÃO HETERÓLOGA DOS GENES HPDE4B EM E. COLI... In: Anais da VIII Reunião Anual de Iniciação Científica (RAIC 2020) e II Reunião Anual de Iniciação em Inovação e Desenvolvimento Tecnológico (RAIDTEC 2020). Anais...(RJ) UFRRJ, 2020. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/VIIIraic2020/385969-CLONAGEM-E-EXPRESSAO-HETEROLOGA-DOS-GENES-HPDE4B-EM-E-COLI. Acesso em: 22/05/2025