AVALIAÇÃO COMPARATIVA DE MEIOS BASE DE CULTIVO DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS: RENDIMENTO CELULAR, VIABILIDADE E POTENCIAL DIFERENCIADOR EM ENSAIOS OSTEOGÊNICOS E ADIPOGÊNICOS

Felipe Pires do Couto; Priscila Grion de Miranda Borchio; Marceli Leano da Silva; Wanderson de Souza; Rosana Bizon Vieira Carias

Título do Trabalho

Autores

Felipe Pires do Couto
Priscila Grion de Miranda Borchio
Marceli Leano da Silva
Wanderson de Souza
Rosana Bizon Vieira Carias

Modalidade

Pesquisa Científicas

Área temática

FENOMENOS E TECNOLOGIAS

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/scunifasefmp2023/711074-avaliacao-comparativa-de-meios-base-de-cultivo-de-celulas-tronco-mesenquimais--rendimento-celular-viabilidade-e-

ISSN

2675-8563

Palavras-Chave

Células-tronco mesenquimais, cultura primária.

Resumo

Introdução: Culturas primárias de células-tronco mesenquimais (MSC) representam um recurso relevante nos estudos relacionados à medicina regenerativa, especialmente devido à capacidade dessas células de se diferenciarem em tipos celulares especializados, como osteoblastos e condrócitos, e sua habilidade de secretar moléculas bioativas que desempenham um papel fundamental na regeneração tecidual. No âmbito global, busca-se o desenvolvimento de produtos derivados de MSC cultivadas in vitro para devido registro e autorização de uso em seres humanos pelas agências reguladoras da saúde, tais como a Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) no Brasil, a Food and Drug Administration (FDA) para os Estados Unidos da América e Canadá, e a Agência Europeia de Medicamentos (EMA) para a Comunidade Europeia. É relevante observar que essas agências avaliam, especialmente, as questões relacionadas à qualidade e à segurança do produto. No contexto brasileiro, o uso terapêutico de MSC é permitido somente se reconhecido pelo Conselho Federal de Medicina ou do Conselho Federal de Odontologia, os quais consideram, ainda, sua eficácia terapêutica. Atualmente, no Brasil, terapias com células-tronco, que não as hematopoiéticas, produtos de terapias avançadas (PTA) são consideradas experimentais e sua aplicação está sujeita aos critérios do sistema CEP/Conep, não podendo os tratamentos serem anunciados, nem comercializados. Entretanto, é importante observar que agências reguladoras internacionais já reconheceram dezenas de produtos baseados em MSC, sinalizando para um crescente interesse de desenvolvimento nessa área. A literatura científica aponta para a falta de padronização das metodologias aplicadas ao isolamento e à manutenção das MSC, os quais podem estar relacionados aos resultados conflitantes, tanto para potenciais in vitro de diferenciação, quanto para taxa proliferativa Pudemos observar que as comparações dos relatos científicos para as propriedades das MSC é dificultada, uma vez que ou são incompletos ou fazem uso de condições diferentes de cultivo, principalmente em relação ao meio de cultivo utilizado. Objetivo: Diante disso, o propósito deste projeto consiste em conduzir uma avaliação comparativa da influência de diferentes meios de cultivo sobre a proliferação e a diferenciação osteogênica. Essas informações são de fundamental importância, uma vez que estamos focados em um cultivo prolongado que visa a expansão do número de células e na diferenciação osteogênica, sendo esse último o interesse alinhado ao objetivo geral do nosso grupo de pesquisa, que busca desenvolver terapias celulares para o tratamento de lesões ósseas. Metodologia: Amostras de tecido adiposo foram coletadas, conforme projeto aprovado pelo CEP UNIGRANRIO/UERJ, CAAE 46799215.1.0000.5283. As células-tronco derivadas de tecido adiposo (do inglês, Adipose Derived Stem Cells - ADSC) foram semeadas em placas próprias ao cultivo in vitro com variação no meio base: (A) Dulbecco's Modified Eagle's Medium Low Glucose (DMEM LOW GLUCOSE); (B) Dulbecco's Modified Eagle's Medium High Glucose (DMEM HIGH GLUCOSE); (C) Dulbecco's Modified Eagle's Medium: Nutrient Mixture F12 (DMEM/F12); Opti-MEM™ - Reduced-Serum Medium (OPTIMEM). Foram realizados ensaios microbiológicos (fungos, bactérias, micoplasma), viabilidade e quantificação celular, e induções para linhagens adipogênica e osteogênica. Para avaliação quantitativa, viabilidade e capacidade proliferativa, foram realizadas contagens em câmara de Neubauer com uso de corante de exclusão de células mortas Azul de Trypan. A coloração por Oil Red 0,5% avaliou o potencial de diferenciação das ASC em células acumuladoras de lipídeos e a coloração por Alizarina Red S 40mM pH 4.1-4.3 o potencial de depositar cálcio na matriz extracelular mediante estímulo. Foram aplicadas as Boas Práticas de Métodos in vitro e metodologias utilizadas na qualificação de células e PTA. Resultados e Discussão: Foram avaliadas culturas celulares obtidas de amostras de tecido adiposo de 7 doadores, que consentiram e assinaram o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. Para os ensaios de análise, foram utilizadas somente células que tiveram resultado negativo para a detecção de agentes microbiológicos. Para os ensaios de rendimento celular, tempo de duplicação foi possível observar que o meio de cultivo que mais favoreceu a proliferação e promoveu maior duplicação celular, foram os meios DMEM/F12 e OPTIMEM. Para o percentual de viabilidade, não houve diferença estatística entre as amostras. Quanto à avaliação da indução à diferenciação osteogênica, as células cultivadas em todos os meios avaliados, foram capazes de se diferenciar, quando apropriadamente induzidas. E, para a indução à diferenciação adipogênica foi observado que as células que foram cultivadas no meio DMEM/F12 mostraram maior produção de vesículas lipídicas que os demais meios utilizados. Conclusão: Este estudo foi estimulado por dados preliminares obtidos em nosso grupo de pesquisa, que demonstraram que determinados meios de cultivo interferem tanto no potencial de diferenciação osteogênica de células, quanto na atividade proliferativa - uma vez que estas são propriedades importantes para obtenção de um número suficiente para uso de células na produção de PTA. Nossos resultados indicam que o uso dos meios DMEM/F12 e OPTIMEM são mais eficazes na obtenção de maior quantidade de células. Quanto à diferenciação, nas imagens obtidas por microscopia de contraste fase, o meio DMEM/F12 apresentou maior produção de vesículas lipídicas, comparado aos outros meios. A continuidade do desenvolvimento deste projeto é fundamental, uma vez que pode contribuir para a geração de informações necessárias sobre as propriedades das MSC cultivadas in vitro.

Título do Evento: XXIX Semana Científica UNIFASE/FMP
Cidade do Evento: Petrópolis
Título dos Anais do Evento: Anais Semana Científica
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

COUTO, Felipe Pires do et al.. AVALIAÇÃO COMPARATIVA DE MEIOS BASE DE CULTIVO DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS: RENDIMENTO CELULAR, VIABILIDADE E POTENCIAL DIFERENCIADOR EM ENSAIOS OSTEOGÊNICOS E ADIPOGÊNICOS.. In: . Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/SCUNIFASEFMP2023/711074-AVALIACAO-COMPARATIVA-DE-MEIOS-BASE-DE-CULTIVO-DE-CELULAS-TRONCO-MESENQUIMAIS--RENDIMENTO-CELULAR-VIABILIDADE-E-. Acesso em: 11/05/2025