COLETA, OBTENÇÃO E ARMAZENAMENTO DE CÉLULAS DÉRMICAS E EPIDÉRMICAS DE POLIDACTILIA PARA FORMAÇÃO DE UM ACERVO DE MATERIAL BIOLÓGICO EM BIOBANCOS DO RIO DE JANEIRO

Juliana Barbosa Torreão Dáu; Marcus Vinicius Telles Teixeira; Esther Rieko Takamori; Hamilton da Silva Junior; Rosana Bizon Vieira Carias; Radovan Borojevic

Título do Trabalho

Autores

Juliana Barbosa Torreão Dáu
Marcus Vinicius Telles Teixeira
Esther Rieko Takamori
Hamilton da Silva Junior
Rosana Bizon Vieira Carias
Radovan Borojevic

Modalidade

Trabalhos Científicos

Área temática

Exemplo de Área Temática

Data de Publicação

18/12/2020

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/scunifasefmp/281453-coleta-obtencao-e-armazenamento-de-celulas-dermicas-e-epidermicas-de-polidactilia-para-formacao-de-um-acervo-de-

ISSN

2675-8563

Palavras-Chave

Polidactilia, Biobanco, Pele, Criopreservação, Controle de qualidade celular

Resumo

Introdução: Polidactilia é descrita como uma anomalia congênita associada a alterações gênicas que ocasionam na formação e presença de dígitos extranumerários durante o desenvolvimento embrionário. Existem diversas formas de apresentação fenotípica podendo ser da região pré-axial, axial ou pós-axial, unilateral ou bilateral e em diferentes estágios de formação. A forma rudimentar geralmente é não funcional e conectada a pele por um pedúnculo e o processo de excisão é simples, enquanto as formas que apresentam integração óssea com o metacarpo e as falanges precisam de uma intervenção ortopédica complexa. O dedo extranumerário rudimentar é um resto cirúrgico cujas células apresentam potencialmente uma alta taxa proliferativa devido à idade dos indivíduos e estado de desenvolvimento dos tecidos. Fibroblastos e queratinócitos isolados da pele dessas estruturas ainda não foram descritas e montar uma coleção em biobancos representativa de uma manifestação genética aberrante é importante para futuramente disponibilizar o material para pesquisas. Objetivos: Levantar o número de intervenções para retirada de dedos extranumerários nos distritos atendidos pelo Hospital Alcides Carneiro. Coletar material biológico, isolar, realizar controle de qualidade das características in vitro e armazenar células dérmicas e epidérmicas em biobancos. Metodologia: O material biológico que seria descartado como resto cirúrgico da exérese do dedo extranumerário foi concedido de forma voluntária com a aprovação do responsável legal do indivíduo menor de idade através do termo de consentimento livre esclarecido. As amostras foram coletadas pelos biobancos BBRJ (CONEP nº.B-071) e B-FASE (CONEP nº.B-074). A pele foi separada do bastão cartilaginoso com auxílio de bisturi. O tecido foi pesado e cortado em pedaços de 3 mm e incubados em dispase por 18h e a derme foi separada da epiderme. O isolamento de queratinócitos e fibroblastos ocorreu separadamente com a derme sendo incubada em colagenase tipo 1 e a epiderme tripsina. A ação enzimática foi inativada, a suspensão centrifugada, as células da epiderme plaqueadas na proporção de 4x10e4 células por cm2 em meio comercial especifico para queratinócitos e células da derme de acordo com o peso, 0.15g por 25cm2 cm em DMEM +10% SFB. As culturas foram mantidas e expandidas até o congelamento e armazenadas em nitrogênio líquido. Imagens da cultura foram capturadas e a cada subcultivo as células quantificadas. Foram processadas 5 amostras de pele das quais MB16 e MB24 tiveram um pedaço de pele fixado em PF4% para processamento histológico em parafina e coloração em HE. A capacidade de formação de pele equivalente in vitro da amostra MB11 foi avaliada. Os fibroblastos foram centrifugados com fibronectina ou laminina para formação da derme e após 24h queratinócitos foram semeados. Seguindo as trocas de meio específicas e transição para ar-liquido ao fim de 10 dias de experimento a amostra foi fixada e preparada para coloração por HE. Resultados e Discussão: O levantamento do número de procedimentos associados à polidactilia no Hospital Alcides Carneiro de 2016 até janeiro de 2020 mostrou que 36 procedimentos relacionados à retirada de dedo extranumerário foram realizados. Do período de outubro 2018 a janeiro de 2020 foram coletadas 6 amostras pelos biobancos. Os materiais biológicos eram dedos rudimentares de posicionamento pós-axial com as seguintes características dos consentidores: MB11-1 mês/unilateral; MB16-1 ano/ bilateral; MB23-6 meses/unilateral; MB24-7 meses bilateral; MB25-2 meses;CMR-001/20-4 meses/ unilateral. Desses 6 a maior ocorrência foi de moradores do distrito de Petrópolis e Cascatinha e apenas 1 de Pedro do Rio. O rendimento da primeira passagem foi 1.50x10e7; 2.69x10e6; 7.92x10e6; 3.32x10e6 e 3.2x10e6 queratinócitos/(g) de pele processada e 4.63x10e6; 4.62x10e6; 7.41x10e6 e 9.97x10e6 fibroblastos/(g) de pele das amostras MB11, MB16, MB24, MB25 e CMR001/20 (foi obtido apenas queratinócitos), respectivamente. MB11 e MB24 apresentaram a mesma proporção de queratinócitos aderidos e expandidos do pool total da epiderme (0,77). MB16 teve a proporção de 0,45 e MB25 e CMR001/20 de 0,25 e 0,29. O melhor rendimento de queratinócitos foi da amostra de 1 mês, porém uma correlação de menor idade e maior rendimento não ocorreu em todas as amostras. A de 7 meses teve o segundo maior rendimento e as de 2,10 e 12 meses tiveram resultados próximos apesar da diferença de idade. O padrão observado para as células da epiderme não foi igual para as dérmicas. A amostra de 2 meses teve o maior rendimento de fibroblastos e de 1 mês menor. Ainda que morfologicamente as culturas não tenham apresentado diferenças visuais claras, os dados de rendimento mostram como as amostras de polidactilia são heterogêneas. A pele equivalente formou uma estrutura espessa, mas com camadas desorganizadas e estruturas concêntricas de queratinócitos no entorno e abaixo das regiões com fibroblastos. O esperado seria uma camada dérmica e epidérmica in vitro sem invasão e epiderme estratificada com camadas basal, espinhosa, granulosa e cornificada definida. Na histologia do fragmento de pele analisado antes do processamento a epiderme estratificação normal, mas em algumas regiões foi possível verificar as estruturas concêntricas. Conclusão: Foi possível até o momento verificar o número de casos de polidactilia da região e iniciar a coleta, armazenamento e controles de qualidade celular inicial dos biobancos. Esses dados exploratórios e preliminares apontaram que as células isoladas da pele de polidactilia não apresentam um comportamento de pele normal e devem ser caracterizadas profundamente do ponto de vista celular e molecular a fim de avaliar como a alteração genética afeta fenotipicamente e sua relevância na pesquisa pré-clínica. Dentre as possíveis perspectivas futuras há o desenvolvimento de um projeto de pesquisa para realização dessas avaliações mediante aprovação de projeto pelo Comitê de Ética.

Título do Evento: XXVI Semana Científica UNIFASE/FMP
Título dos Anais do Evento: Anais da Semana Científica
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

DÁU, Juliana Barbosa Torreão et al.. COLETA, OBTENÇÃO E ARMAZENAMENTO DE CÉLULAS DÉRMICAS E EPIDÉRMICAS DE POLIDACTILIA PARA FORMAÇÃO DE UM ACERVO DE MATERIAL BIOLÓGICO EM BIOBANCOS DO RIO DE JANEIRO.. In: Anais da Semana Científica. Anais...Petrópolis(RJ) Centro Universitário Arthur Sá Earp Neto, 2020. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/SCUNIFASEFMP/281453-COLETA-OBTENCAO-E-ARMAZENAMENTO-DE-CELULAS-DERMICAS-E-EPIDERMICAS-DE-POLIDACTILIA-PARA-FORMACAO-DE-UM-ACERVO-DE-. Acesso em: 13/06/2025