ESTUDO COMPARATIVO DOS PARÂMETROS QUE IMPACTAM O DESENVOLVIMENTO DE UM MODELO DE DERME IN VITRO.

José Alberto Arariba Drago; Juliana Barbosa Torreão Dáu; Hamilton da Silva Junior; Rosana Bizon Vieira Carias

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Trabalho

Título do Trabalho

ESTUDO COMPARATIVO DOS PARÂMETROS QUE IMPACTAM O DESENVOLVIMENTO DE UM MODELO DE DERME IN VITRO.

Autores

José Alberto Arariba Drago
Juliana Barbosa Torreão Dáu
Hamilton da Silva Junior
Rosana Bizon Vieira Carias

Modalidade

Trabalhos Científicos

Área temática

Geral

Data de Publicação

15/12/2020

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/sc_fase/194480-estudo-comparativo-dos-parametros-que-impactam-o-desenvolvimento-de-um-modelo-de-derme-in-vitro

ISSN

2675-8563

Palavras-Chave

Fibroblastos, derme-equivalente, cultivo celular, modelo pré-clínico, tempo de duplicação.

Resumo

Estudo comparativo dos parâmetros que impactam o desenvolvimento de um modelo de derme in vitro Introdução:Equivalentes dermoepidérmicos (pele-equivalente) são estruturas tridimensionais produzidas in vitro, mimetizando as propriedades da pele in vivo. Estes são constituídos por uma camada formada por fibroblastos e por outra camada constituída por queratinócitos. Na clínica, têm grande relevância para geração de enxertos de pele, implantáveis em pacientes queimados, com úlceras ou genodermatoses. Na pesquisa pré-clínica, são essenciais como modelo de avaliação da dinâmica do tecido in vitro e estudo de novas abordagens para a Medicina Regenerativa. Objetivos:Avaliar a interferência dos parâmetros: idade e região anatômica na derme 3D. Os dados morfológicos e de proliferação serão comparados em ensaios in vitro. Materiais e métodos: Os materiais biológicos adquiridos tiveram aprovação pelo CEP da UNIGRANRIO, com Certificado de Apresentação para Apreciação Ética: 46799215.1.0000.5283. Fibroblastos obtidos de biópsias de pele do prepúcio de indivíduo de 3 anos(A) e do couro cabeludo de indivíduo de 56 anos (B) foram isolados utilizando as enzimas dispase e colagenase tipo I. As culturas foram mantidas em DMEM +10% SFB e expandidas até o congelamento de 8x10e5 células por criotubo e armazenamento em nitrogênio líquido. Os descongelamentos ocorreram entre a primeira e a segunda passagem. As culturas foram expandidas até o plaqueamento em membrana de policarbonato de 0,47cm2e garrafa 25cm2 para análise da morfologia. As biópsias e culturas foram manipuladas separadamente. As amostras foram plaqueadas com duas variáveis: concentração(5x10e4 células e 5x10e5) e tempo de cultivo (7 e 14 dias). O material foi fixado com paraformaldeído 4% por 24h e processado para inclusão em parafina e coloração de hematoxilina–eosina. Para avaliação da proliferação foi calculado o valor de PDL (populationdoublinglevel) = 3,22(log n0 células finais – log n0 células iniciais) e para obter o número de dias necessários para uma duplicação foram considerados dias de cultivo /PDL. A captura de imagens da cultura foi realizada com objetiva de 4x e 10x no microscópio invertido e a histologia na objetiva de 16x do microscópio óptico. Resultados e discussão: No processamento de A, 0,75g de tecido rendeu 1,4x10e7 células e B, apesar de ter 1,48g, rendeu 3,4x10e6 células para criopreservação. Também, a recuperação de células da amostra B foi menor que a A após o descongelamento. O número de dias necessários para o plaqueamento dos insertos com as amostras A e B foi de 1,8 e 2,2, respectivamente; e da garrafa controle com 7 dias de cultivo foi 2,2 e 18,9 dias, respectivamente. Em todos os pontos analisados, a taxa proliferativa de A foi maior que da amostra B. Morfologicamente os fibroblastos da amostra B apresentaram citoplasma aumentado e borda pouco definida, características de células senescentes. Ao contrário, a morfologia fusiforme era bem definida nas células da cultura A, característica de células proliferativas. A análise histológica dos insertos com a amostra A na quantidade de 5x10e5 células revelou uma estratificação celular de aproximadamente 0,02mm com 7 dias ou 14 dias de cultivo. Já na quantidade de 5x10e4, o tecido alcançou no máximo 0,01mm e foi mais difícil identificar separadamente as camadas de células. Conclusão: Os resultados apontam a idade e a região anatômica das biópsias como parâmetros importantes na formação da derme 3D, haja vista que os fibroblastos oriundos do couro cabeludo do paciente de maior faixa etária apresentaram menor taxa proliferativa e maior grau de senescência em relação à amostra A. Ademais, a histologia evidenciou maior estratificação do tecido sob a condição de 5x10e5 células. Portanto, são necessários mais estudos sobre a formação dérmica in vitro, mas os fatores idade e localização anatômica das biópsias e concentração celular configuram-se como variações relevantes para o sucesso de ensaios pré-clínicos.

Título do Evento: Semana Científica FMP/FASE
Cidade do Evento: Petrópolis
Título dos Anais do Evento: Anais da Semana Científica
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

DRAGO, José Alberto Arariba et al.. ESTUDO COMPARATIVO DOS PARÂMETROS QUE IMPACTAM O DESENVOLVIMENTO DE UM MODELO DE DERME IN VITRO... In: Anais da Semana Científica. Anais...Petrópolis(RJ) Faculdade de Medicina de Petrópolis/Faculdade Arthur Sá Earp Neto, 2019. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/SC_FASE/194480-ESTUDO-COMPARATIVO-DOS-PARAMETROS-QUE-IMPACTAM-O-DESENVOLVIMENTO-DE-UM-MODELO-DE-DERME-IN-VITRO. Acesso em: 30/06/2025