ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS, CLÍNICOS E ISOLAMENTO DE ANAPLASMA MARGINALE A PARTIR DO SANGUE DE BOVINO NATURALMENTE INFECTADO NA REGIÃO NOROESTE DO ESTADO DE MINAS GERAIS

Thays Figueiroa dos Santos; Jenevaldo Barbosa da Silva; Matheus Dias Cordeiro; Adivaldo Henrique da Fonseca

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ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS, CLÍNICOS E ISOLAMENTO DE ANAPLASMA MARGINALE A PARTIR DO SANGUE DE BOVINO NATURALMENTE INFECTADO NA REGIÃO NOROESTE DO ESTADO DE MINAS GERAIS

Autores

Thays Figueiroa dos Santos
Jenevaldo Barbosa da Silva
Matheus Dias Cordeiro
Adivaldo Henrique da Fonseca

Modalidade

Resumo expandido

Área temática

Parasitologia e doenças parasitárias

Data de Publicação

27/01/2021

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/samvet2020/318312-aspectos-epidemiologicos-clinicos-e-isolamento-de-anaplasma-marginale-a-partir-do-sangue-de-bovino-naturalmente-

ISSN

2237-4949

Palavras-Chave

Anaplasmose, bovinocultura, carrapatos, in vitro, moscas.

Resumo

ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS, CLÍNICOS E ISOLAMENTO DE Anaplasma marginale A PARTIR DO SANGUE DE BOVINO NATURALMENTE INFECTADO NA REGIÃO NOROESTE DO ESTADO DE MINAS GERAIS ¹ FIGUEIROA, Thays; ² SILVA, Jenevaldo Barbosa; ³ CORDEIRO, Matheus Dias; 3 FONSECA, Adivaldo Henrique ¹ Discente, graduação em Medicina Veterinária, UFRRJ, bolsista CNPq; ² Docente, Instituto de Ciências Agrárias, UFVJM; ³ Docente, PPGCV/UFRRJ Palavras-chave: Anaplasmose, bovinocultura, carrapatos, in vitro, moscas. Introdução A anaplasmose bovina, cujo agente etiológico são bactérias da espécie Anaplasma marginale, acomete os ruminantes nas regiões tropicais e subtropicais do globo, tratando-se de doença endêmica em alguns países das Américas do Sul e Central com impactos significativos na bovinocultura (KOCAN et al., 2010). No Brasil, a transmissão ocorre por intermédio de carrapatos da espécie Rhipicephalus microplus, moscas hematófagas dos gêneros Stomoxys e Tabanus, além das formas transplacentária e iatrogênica (KESSLER, 2001). A prevalência de anaplasmose nesses animais no País varia de 12,3% a 100% (VIDOTTO; MARANA, 2001). Os sinais clínicos incluem anemia, icterícia, queda na produção de leite, perda de peso, febre, letargia, aborto e morte (KOCAN et al., 2010). O isolamento de microrganismos em sistema in vitro, como em células embrionárias de carrapatos, permite a realização de experimentos, produção de antígenos e imunógenos para confecção de vacinas e testes sorológicos, além de estudos de interação entre agente e vetor, reduzindo a necessidade da utilização de animais na rotina laboratorial (BELL-SAKYI et al., 2007). Face à importância da anaplasmose na bovinocultura, o objetivo do presente estudo foi investigar a ocorrência da doença, bem como a presença de A. marginale em bovinos de propriedades leiteiras do noroeste de Minas Gerais, além de isolar o agente etiológico em sistema in vitro. Material e Métodos Foram coletadas amostras de sangue de 40 bovinos fêmeas, mestiças com raça holandesa, de quatro propriedades leiteiras da região noroeste do estado de Minas Gerais. O sangue foi colhido em sistema a vácuo e utilizado para a confecção esfregaço sanguíneo para o diagnóstico microscópico. Parte do material foi submetida à extração do DNA total com Wizard® Genomic DNA Purification Kit (Promega, Madison, WI, USA), seguindo protocolo descrito pelo fabricante. O material extraído foi utilizado na técnica de PCR para detecção do gene msp5 de A. marginale em uma reação de semi Nested (SINGH et al., 2012). Uma bezerra que apresentava mucosas hipocoradas, dificuldade de locomoção e respiração ofegante teve o sangue colhido também para a realização do isolamento de A. marginale seguindo metodologia desenvolvida por Blouin et al. (2000) em células embrionárias do carrapato R. microplus, linhagem BME/PIBB36 (BAÊTA, 2015). O isolado obtido está sendo mantido em estufa à 32Cº com troca semanal de meio Leibovitz’s L 15B (SigmaTM) com 5% de soro fetal bovino, NaHCO3 (2.5 g/L) e tamponante HEPES (MUNDERLOH et al., 1996). Semanalmente uma alíquota do material isolado é submetido à citocentrifugação para a produção de lâminas para visualização de possível crescimento bacteriano com auxílio da microscopia óptica. Tanto as lâminas de esfregaço sanguíneo, quanto as de citocentrifugação, foram fixadas em álcool metílico por três minutos e coradas com Giemsa à 10% em água destilada por 30 minutos. Mensalmente uma alíquota do isolado é submetida à PCR convencional para constatar a presença de bactérias Anaplasmataceae através da detecção do gene 16S rRNA (MARUMOTO et al., 2007). Resultados e Discussão Ao todo, 32,50% dos animais testados foram positivos para A. marginale (n= 13/40). Na propriedade A, de onde foi coletado sangue para o isolamento, 23,07% foram positivos (n= 3/13), na B esse valor foi de 80% (n= 8/10), na C foi de 44,44% (n= 4/9) e na D 62,50% (n= 5/8). Em todas as propriedades os fazendeiros se queixaram da presença de carrapatos e de moscas dos estábulos, nome vulgar dado aos dípteros do gênero Stomoxys. O isolado do animal com suspeita clínica de anaplasmose da propriedade A e que foi positivo na PCR A. marginale e microscopia, demonstrou crescimento bacteriano, bem como também o desenvolvimento de mórulas e colônias no interior das células da linhagem BME/PIBB36 compatíveis com bactérias Anaplasmataceae (figura1). A presença das bactérias foi constatada também na PCR. Os animais com suspeita clínica foram tratados com dipropionato de imidocarb, cloridrato de oxitetraciclina e vitamina B 12, obtendo-se melhora clínica. Um dos animais testados e positivo para A. marginale veio à óbito na propriedade C, não tendo sido submetido ao protocolo terapêutico. Figura1: seta e círculo indicando a presença de mórulas de Anaplasma no interior da célula da linhagem BME/PIBB36 de R. microplus (A); seta, asteriscos e círculo indicando o crescimento de colônias de Anaplasma no interior de células da linhagem BMEPIBB36 de R. microplus (B). Microscopia óptica, aumento de 1000 vezes. Conclusão Por meio do presente estudo foi possível observar que a frequência de A. marginale nas propriedades avaliadas está dentro da média Nacional. Além disso, foi possível coletar informações acerca de sinais clínicos e da ocorrência de ectoparasitos associados à transmissão de A. marginale nas fazendas bem como isolar uma nova cepa desse agente, ainda em processo de descrição. Agradecimentos Agradecimento ao CNPq e FAPERJ pelo financiamento da pesquisa. Referências Bibliográficas BAÊTA, B.A. Isolamento e caracterização molecular de duas novas cepas de Anaplasma marginale e estabelecimento de linhagens de células embrionárias do carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus [Tese de Doutorado]. Seropédica: Instituto de Veterinária da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, 2015. BELL-SAKYI, L.; ZWEYGARTH, E.; BLOUIN, E.F.; GOULD, E.A.; JONGEJAN, F. Tick cell lines: tools for tick and tick-borne disease research. Trends in Parasitology, v. 23, n.9, p.450-457, 2007. BLOUIN, E. F.; BARBET, A.F.; YI, J.; KOCAN, K.M.; SALIKI, J. T. Establishment and characterization of an Oklahoma isolate of Anaplasma marginale in cultured Ixodes scapularis cells. Veterinary Parasitology, v. 87, n. 4, p. 301-313, 2000. KESSLER, R. H. Considerações sobre a transmissão de Anaplasma marginale. Pesquisa Veterinária Brasileira, v. 21, n. 4, p. 177-179, 2001. KOCAN, K.M.; DE LA FUENTE, J.; BLOUIN, E.F.; COETZEE, J.F.; EWING, S.A. The natural history of Anaplasma marginale. Veterinary Parasitology, v. 167, p. 95-107, 2010. MARUMOTO, K.; JONCOUR, G.; LAMANDA, P.; INOKUMA, H.; BROUQUI, P. Detection of Anaplasma phagocytophilum and Ehrlichia sp. HF strains in Ixodes ricinus ticks in Brittany, France. Clinical Microbiology and Infection, v. 13, p. 338–34, 2007. MUNDERLOH, U. G.; BLOUIN, E. F.; KOCAN, K. M.; GE, N. L.; EDWARDS, W. L.; KURTTI, T. J. Establishment of the tick (Acari: Ixodidae) - borne cattle pathogen Anaplasma marginale (Rickettsiales:Anaplasmataceae) in tick cell culture. Journal of Medical Entomology, v. 33, n. 4, p. 656-64, 1996. SINGH, H., HAQUE, J.M., SINGH, N.K., RATH, S.S. Molecular detection of Anaplasma marginale infection in carrier cattle. Ticks and Tick-Borne Diseases, v. 3, n. 1, p. 55–58, 2012. VIDOTTO, O.; MARANA, E.R.M. Diagnóstico em anaplasmose bovina. Ciência Rural, v. 31, n. 2, p. 361-368, 2001.

Título do Evento: VI SAMVET 2020 - Semana Acadêmica da Pós-Graduação em Medicina Veterinária - SamVet / VI Mostra de Trabalhos da Medicina Veterinária
Título dos Anais do Evento: Anais SamVet 2020
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

SANTOS, Thays Figueiroa dos et al.. ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS, CLÍNICOS E ISOLAMENTO DE ANAPLASMA MARGINALE A PARTIR DO SANGUE DE BOVINO NATURALMENTE INFECTADO NA REGIÃO NOROESTE DO ESTADO DE MINAS GERAIS.. In: Anais SamVet 2020. Anais...Seropédica(RJ) UFRRJ, 2020. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/SamVet2020/318312-ASPECTOS-EPIDEMIOLOGICOS-CLINICOS-E-ISOLAMENTO-DE-ANAPLASMA-MARGINALE-A-PARTIR-DO-SANGUE-DE-BOVINO-NATURALMENTE-. Acesso em: 18/08/2025