DESENVOLVIMENTO DE UM MÉTODO DE DETECÇÃO DE DOPAGEM GENÉTICA PARA O GENE DA ERITROPOETINA (EPO) EM AMOSTRAS DE DRIED BLOOD SPOTS (DBS)

Publicado em 22/03/2021 - ISBN: 978-65-5941-128-3

Título do Trabalho
DESENVOLVIMENTO DE UM MÉTODO DE DETECÇÃO DE DOPAGEM GENÉTICA PARA O GENE DA ERITROPOETINA (EPO) EM AMOSTRAS DE DRIED BLOOD SPOTS (DBS)
Autores
  • João Victor Meirelles Leite
  • SHEILA BARBARA LOPEZ PEREIRA
  • Matheus Vianna de Oliveira
  • Henrique Marcelo Gualberto Pereira
  • Luciana Pizzatti
Modalidade
Resumo apresentação oral padrão
Área temática
Centro de Ciências Matemáticas e da Natureza (CCMN)/Bioquímica
Data de Publicação
22/03/2021
País da Publicação
Brasil
Idioma da Publicação
Português
Página do Trabalho
https://www.even3.com.br/anais/jgmictac/320023-desenvolvimento-de-um-metodo-de-deteccao-de-dopagem-genetica-para-o-gene-da-eritropoetina-(epo)-em-amostras-de-dr
ISBN
978-65-5941-128-3
Palavras-Chave
Dopagem genética, Eritropoetina, Dried Blood Spots
Resumo
O desenvolvimento das técnicas de biologia molecular e da terapia gênica são promissores para a saúde, mas implicam em um risco potencial quando usados como abordagens não terapêuticas para melhorar o desempenho atlético por meio do uso de células, genes e elementos genéticos, como nas estratégias ilícitas de dopagem genética no esporte. Os avanços recentes comprovados em relação a segurança e aos benefícios da transferência gênica terapêutica em humanos aumentaram a probabilidade de busca do doping genético por atletas. Um dos genes exógenos mais prováveis a serem utilizados como alvo é a eritropoietina (EPO), que codifica para um hormônio glicoproteico produzido principalmente nos rins que regula a massa de glóbulos vermelhos, estimulando a sobrevivência, proliferação e diferenciação de progenitores eritrocíticos. O aumento de eritrócitos é um objetivo perseguido por atletas que desejam aumentar a resistência e o desempenho em competição. Neste contexto, a Agência Mundial Antidopagem decidiu incluir a proibição do doping genético em seu Código Mundial Antidopagem em 2003, definido como "o uso não terapêutico de genes, elementos genéticos e / ou células que têm a capacidade de melhorar o desempenho atlético performance ", portanto, é fundamental o desenvolvimento de técnicas específicas e sensíveis para detectar, em atletas, o doping genético ilícito. Métodos de detecção baseados em tecnologias de PCR têm se mostrado confiáveis para este propósito em amostras de sangue. Neste trabalho, otimizamos a abordagem de detecção do gene EPO, com o objetivo de aumentar a sensibilidade na reação de PCR, pelo uso da sonda TaqMan MGB em vez da sonda TaqMan BHQ em amostras de Dried Blood Spots DBS (manchas de sangue em papel) muito utilizadas na prática clínica. Como resultados obtivemos com a sonda otimizada proposta uma quantificação mínima de 2,5 cópias do transgene EPO em amostras de DNA extraídas de DBS. O ensaio de verificação de eficiência da sonda (MGB) foi realizado através de curva padrão. Além disso, nossos resultados mostram que a qualidade do DNA extraído em DBS com triplicatas armazenadas à temperatura ambiente se mantém estável até 3 meses com quantificações mínimas de 2,5 cópias por ponto amostral. O ensaio de eficiência realizado com curva padrão para os pontos 1; 10; 20; 40 e 50 cópias mostrou uma eficiência dentro de 98% e CV de 7%. Os resultados mostram que o método é reprodutível, robusto e apresenta variação mínima entre operadores. A substituição da sonda e o desenho de primers iniciadores na posição éxon/éxon também permitiu eliminar a etapa de linearização do plasmídeo, anteriormente feito com a enzima MSP1, encurtando o tempo de reação de 3h para 90min agregando rapidez ao método. Nossos resultados aproximam esse método de detecção, utilizando amostras de DBS, à futura inclusão desse método de detecção na rotina de controle de dopagem. No momento a documentação completa do método está em revisão para submissão ao IMMETRO e os resultados estão sendo reunidos para a elaboração do manuscrito. Referencias: López S, Meirelles J, Rayol V, Poralla G, Woldmar N, Fadel B, Figueiredo M, Costa Padilha MD, de Aquino Neto FR, Gualberto Pereira HM, Pizzatti L. Gene doping and genomic science in sports: where are we? Bioanalysis. 2020 Jun;12(11):801-811.
Título do Evento
XLII Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural (JICTAC 2020 - Edição Especial) - Evento UFRJ
Título dos Anais do Evento
Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural
Nome da Editora
Even3
Meio de Divulgação
Meio Digital

Como citar

LEITE, João Victor Meirelles et al.. DESENVOLVIMENTO DE UM MÉTODO DE DETECÇÃO DE DOPAGEM GENÉTICA PARA O GENE DA ERITROPOETINA (EPO) EM AMOSTRAS DE DRIED BLOOD SPOTS (DBS).. In: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural. Anais...Rio de Janeiro(RJ) UFRJ, 2021. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/jgmictac/320023-DESENVOLVIMENTO-DE-UM-METODO-DE-DETECCAO-DE-DOPAGEM-GENETICA-PARA-O-GENE-DA-ERITROPOETINA-(EPO)-EM-AMOSTRAS-DE-DR. Acesso em: 10/07/2025

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