DESENVOLVIMENTO DE UM MÉTODO DE DETECÇÃO DE DOPAGEM GENÉTICA PARA O GENE DA ERITROPOETINA (EPO) EM AMOSTRAS DE DRIED BLOOD SPOTS (DBS)

João Victor Meirelles Leite; SHEILA BARBARA LOPEZ PEREIRA; Matheus Vianna de Oliveira; Henrique Marcelo Gualberto Pereira; Luciana Pizzatti

Título do Trabalho

Autores

João Victor Meirelles Leite
SHEILA BARBARA LOPEZ PEREIRA
Matheus Vianna de Oliveira
Henrique Marcelo Gualberto Pereira
Luciana Pizzatti

Modalidade

Resumo apresentação oral padrão

Área temática

Centro de Ciências Matemáticas e da Natureza (CCMN)/Bioquímica

Data de Publicação

22/03/2021

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/jgmictac/320023-desenvolvimento-de-um-metodo-de-deteccao-de-dopagem-genetica-para-o-gene-da-eritropoetina-(epo)-em-amostras-de-dr

ISBN

978-65-5941-128-3

Palavras-Chave

Dopagem genética, Eritropoetina, Dried Blood Spots

Resumo

O desenvolvimento das técnicas de biologia molecular e da terapia gênica são promissores para a saúde, mas implicam em um risco potencial quando usados como abordagens não terapêuticas para melhorar o desempenho atlético por meio do uso de células, genes e elementos genéticos, como nas estratégias ilícitas de dopagem genética no esporte. Os avanços recentes comprovados em relação a segurança e aos benefícios da transferência gênica terapêutica em humanos aumentaram a probabilidade de busca do doping genético por atletas. Um dos genes exógenos mais prováveis a serem utilizados como alvo é a eritropoietina (EPO), que codifica para um hormônio glicoproteico produzido principalmente nos rins que regula a massa de glóbulos vermelhos, estimulando a sobrevivência, proliferação e diferenciação de progenitores eritrocíticos. O aumento de eritrócitos é um objetivo perseguido por atletas que desejam aumentar a resistência e o desempenho em competição. Neste contexto, a Agência Mundial Antidopagem decidiu incluir a proibição do doping genético em seu Código Mundial Antidopagem em 2003, definido como "o uso não terapêutico de genes, elementos genéticos e / ou células que têm a capacidade de melhorar o desempenho atlético performance ", portanto, é fundamental o desenvolvimento de técnicas específicas e sensíveis para detectar, em atletas, o doping genético ilícito. Métodos de detecção baseados em tecnologias de PCR têm se mostrado confiáveis para este propósito em amostras de sangue. Neste trabalho, otimizamos a abordagem de detecção do gene EPO, com o objetivo de aumentar a sensibilidade na reação de PCR, pelo uso da sonda TaqMan MGB em vez da sonda TaqMan BHQ em amostras de Dried Blood Spots DBS (manchas de sangue em papel) muito utilizadas na prática clínica. Como resultados obtivemos com a sonda otimizada proposta uma quantificação mínima de 2,5 cópias do transgene EPO em amostras de DNA extraídas de DBS. O ensaio de verificação de eficiência da sonda (MGB) foi realizado através de curva padrão. Além disso, nossos resultados mostram que a qualidade do DNA extraído em DBS com triplicatas armazenadas à temperatura ambiente se mantém estável até 3 meses com quantificações mínimas de 2,5 cópias por ponto amostral. O ensaio de eficiência realizado com curva padrão para os pontos 1; 10; 20; 40 e 50 cópias mostrou uma eficiência dentro de 98% e CV de 7%. Os resultados mostram que o método é reprodutível, robusto e apresenta variação mínima entre operadores. A substituição da sonda e o desenho de primers iniciadores na posição éxon/éxon também permitiu eliminar a etapa de linearização do plasmídeo, anteriormente feito com a enzima MSP1, encurtando o tempo de reação de 3h para 90min agregando rapidez ao método. Nossos resultados aproximam esse método de detecção, utilizando amostras de DBS, à futura inclusão desse método de detecção na rotina de controle de dopagem. No momento a documentação completa do método está em revisão para submissão ao IMMETRO e os resultados estão sendo reunidos para a elaboração do manuscrito. Referencias: López S, Meirelles J, Rayol V, Poralla G, Woldmar N, Fadel B, Figueiredo M, Costa Padilha MD, de Aquino Neto FR, Gualberto Pereira HM, Pizzatti L. Gene doping and genomic science in sports: where are we? Bioanalysis. 2020 Jun;12(11):801-811.

Título do Evento: XLII Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural (JICTAC 2020 - Edição Especial) - Evento UFRJ
Título dos Anais do Evento: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

LEITE, João Victor Meirelles et al.. DESENVOLVIMENTO DE UM MÉTODO DE DETECÇÃO DE DOPAGEM GENÉTICA PARA O GENE DA ERITROPOETINA (EPO) EM AMOSTRAS DE DRIED BLOOD SPOTS (DBS).. In: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural. Anais...Rio de Janeiro(RJ) UFRJ, 2021. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/jgmictac/320023-DESENVOLVIMENTO-DE-UM-METODO-DE-DETECCAO-DE-DOPAGEM-GENETICA-PARA-O-GENE-DA-ERITROPOETINA-(EPO)-EM-AMOSTRAS-DE-DR. Acesso em: 10/07/2025