A INFLUÊNCIA DOS CANAIS DE EFLUXO DE CÁLCIO NA DESESTABILIZAÇÃO LISOSSOMAL INDUZIDA PELA ATIVAÇÃO DO RECEPTOR P2X7

Clara Soares Aragão; Stephanie Alexia Cristina Silva Santos; Luiz Eduardo Baggio Savio; Eleonora Kurtenbach

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Trabalho

Título do Trabalho

A INFLUÊNCIA DOS CANAIS DE EFLUXO DE CÁLCIO NA DESESTABILIZAÇÃO LISOSSOMAL INDUZIDA PELA ATIVAÇÃO DO RECEPTOR P2X7

Autores

Clara Soares Aragão
Stephanie Alexia Cristina Silva Santos
Luiz Eduardo Baggio Savio
Eleonora Kurtenbach

Modalidade

Resumo apresentação oral padrão

Área temática

Centro de Ciências da Saúde (CCS)/Biofísica

Data de Publicação

22/03/2021

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/jgmictac/319735-a-influencia-dos-canais-de-efluxo-de-calcio-na-desestabilizacao-lisossomal-induzida-pela-ativacao-do-receptor-p2x

ISBN

978-65-5941-128-3

Palavras-Chave

Purinérgicos, P2X7, Catepsina B, Canais de cálcio, Inflamação

Resumo

Os macrófagos são células que participam do contexto de respostas inflamatórias como a ativação do complexo inflamassoma NLRP3, que ao ser ativado libera citocinas pró-inflamatórias maduras, como a IL-1beta. Essa ativação pode acontecer por meio de dois estímulos sendo o primeiro ativado por sinais via a presença de patógenos e o segundo sinal pela ativação do receptor P2X7, ROS mitocondrial, ruptura ou dano lisossomal e consequente vazamento de catepsina B para o citoplasma, efluxo de potássio, entre outros. Sabe-se que a ativação do receptor P2X7 leva ao aumento do cálcio citoplasmático podendo modular a abertura dos poros de panexina-1 e também a atividade de outros canais iônicos permeáveis ao cálcio que também participam dessa resposta inflamatória via inflamassoma NLRP3. Foi mostrado que a ativação deste receptor pode ainda levar a saída da protease catepsina B para o citoplasma e para o meio extracelular (LOPEZ-CASTEJON et al., 2010). Trabalhos anteriores do nosso grupo mostraram que macrófagos peritoneais de camundongos C57Bl/6 incubados com o marcador de lisossomo, Lysotracker Green por 45 minutos, continham lisossomos/endolisossomos fluorescentes quando observados por microscopia confocal. E mais, que estes eram reduzidos após tratamento com ATP extracelular em concentrações acima de 100 micromolar. Experimentos utilizando inibidores para o receptor P2X7 e macrófagos peritoneais de camundongos C57Bl/6 nocautes para este receptor confirmaram que essa redução de lisossomos fluorescentes era dependente da ativação deste receptor, assim como a liberação de catepsina B ativa do interior dos lisossomos para o citoplasma e para o meio extracelular. Considerando que a ativação do receptor P2X7 é capaz de desestabilizar a membrana de lisossomos e que sua ativação provoca o aumento de cálcio extracelular resolvemos estudar a influência do cálcio no dano lisossomal a partir da ativação deste receptor. Inicialmente foram realizados ensaios de endocitose em macrófagos peritoneais de camundongos C57Bl/6 com marcadores fluorescentes de endossomos tardios (Lucifer Yellow) e lisossomos (Lysotracker green) como descrito acima. Em seguida esses macrófagos foram mantidos na presença dos quelantes de cálcio EGTA e BAPTA-AM por 30 minutos seguido de tratamento com 5 mM de ATP. Os resultados obtidos mostraram que a retirada do cálcio bloqueou a redução de lisossomos/endossomos fluorescentes, induzido pela ativação do receptor P2X7. Em seguida avaliamos a participação dos canais de efluxo de cálcio presentes na membrana de lisossomos nesse efeito. Para isso novos ensaios de endocitose seguido de observação de lisossomos fluorescentes por microscopia confocal e de acompanhamento da atividade de catepsina no citoplasma foram realizados, agora na presença de 2-APB e verapamil, inibidores dos canais TRPM e TPC, respectivamente. Mostramos que tanto 2-APB como o verapamil foram capazes de inibir o efeito de dano lisossomal induzido pela ativação do receptor P2X7 pelo ATP extracelular. Estes dados corroboram a participação do canal de panexina-1, mostrado neste trabalho. Futuramente pretendemos ainda avaliar a contribuição do receptor P2X4 na membrana de lisossomos (Murrel-Lagnado and Frick, 2019). Os dados obtidos apoiam o papel fundamental do ATP extracelular como sinal de perigo e fornecem um novo mecanismo para explicar como estímulos diversos podem participar da ativação do inflamassoma NLRP3. LOPEZ-CASTEJON, G. et al. P2X 7 Receptor-Mediated Release of Cathepsins from Macrophages Is a Cytokine-Independent Mechanism Potentially Involved in Joint Diseases. The Journal of Immunology, v. 185, n. 4, p. 2611–2619, 2010. RUTH D MURELL-LAGNADO and MANFRED FRICK. P2X4 and lysosome fusion. Current Opinion in Pharmacology, v. 47, p. 126-132

Título do Evento: XLII Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural (JICTAC 2020 - Edição Especial) - Evento UFRJ
Título dos Anais do Evento: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

ARAGÃO, Clara Soares et al.. A INFLUÊNCIA DOS CANAIS DE EFLUXO DE CÁLCIO NA DESESTABILIZAÇÃO LISOSSOMAL INDUZIDA PELA ATIVAÇÃO DO RECEPTOR P2X7.. In: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural. Anais...Rio de Janeiro(RJ) UFRJ, 2021. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/jgmictac/319735-A-INFLUENCIA-DOS-CANAIS-DE-EFLUXO-DE-CALCIO-NA-DESESTABILIZACAO-LISOSSOMAL-INDUZIDA-PELA-ATIVACAO-DO-RECEPTOR-P2X. Acesso em: 13/05/2025