OTIMIZAÇÃO DA ESTABILIDADE IN VITRO DA PROTEÍNA HCP DO SISTEMA DE SECREÇÃO DO TIPO VI DE KLEBSIELLA PNEUMONIAE PARA ESTUDOS ESTRUTURAIS E FUNCIONAIS

Nadine Tonelli Cavalari; Maria Eduarda Ferreira Do Rosário; DEBORA CAROLINE AMORIM DE SOUZA; Gisele Cardoso de Amorim; Marcos Caique Santana Silva

Título do Trabalho

Autores

Nadine Tonelli Cavalari
Maria Eduarda Ferreira Do Rosário
DEBORA CAROLINE AMORIM DE SOUZA
Gisele Cardoso de Amorim
Marcos Caique Santana Silva

Modalidade

Resumo apresentação oral curta

Área temática

Campus Duque de Caxias/Bioquímica

Data de Publicação

22/03/2021

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/jgmictac/318627-otimizacao-da-estabilidade-in-vitro-da-proteina-hcp-do-sistema-de-secrecao-do-tipo-vi-de-klebsiella-pneumoniae-pa

ISBN

978-65-5941-128-3

Palavras-Chave

Klebsiella pneumoniae, T6SS, HCP

Resumo

Klebsiella pneumoniae é uma bactéria Gram-negativa da família Enterobacteriaceae, que causa graves infecções urinárias e respiratórias. Apresenta resistência a múltiplos antibióticos, incluindo os de última geração, o que torna extremamente necessário o estudo de seus fatores de virulência. Um destes é o sistema de secreção do tipo VI (T6SS), uma estrutura do tipo agulha, derivada evolutivamente do bacteriófago T4. O T6SS é formado por um complexo de, no mínimo, treze proteínas, e secreta proteínas efetoras, importantes na patogenicidade e na competição interespécies (CIANFANELLI et al., 2016; CASCALES et al., 2012). Dentre as proteínas que compõem o sistema, estão duas cópias da Hemolysin co-regulated protein (HCP), HCP1 e HCP2. A HCP forma um anel hexamérico com aproximadamente 120 kDa. Esses anéis se associam formando o tubo interno do T6SS. Durante a polimerização do tubo interno, a HCP se liga às proteínas efetoras no citosol da bactéria e as transporta, em um processo de contração do tubo, para uma célula-alvo. O projeto tem como objetivo a caracterização estrutural e bioquímica da proteína HCP, e para tal, é necessária a obtenção de uma amostra solúvel e estável. Foi realizada a expressão da proteína em Escherichia coli (Rosetta pLysS) a 15oC, com 0,5 mM de IPTG (indutor da expressão) por 20 horas, e também sua purificação por cromatografia de afinidade a níquel. Foi feita ainda a clivagem da etiqueta de histidinas com trombina, e observou-se que a HCP2 é mais estável em solução nesta condição. Estas amostras foram analisadas por cromatografia de exclusão molecular com espalhamento de luz a múltiplos ângulos (SEC-MALS) e espalhamento de raios-X a baixo ângulo (SAXS). Os dados indicam a presença de agregados de alto peso molecular. Utilizando microscopia de contrastação negativa, observamos estruturas semelhantes aos anéis hexaméricos em diferentes tamanhos, indicando que a amostra está heterogênea, e serão testados então novos reagentes de contraste. Buscando aumentar a solubilidade da HCP2, foram realizadas 7 mutações e 1 deleção em resíduos localizados na interface de interação do anel hexamérico que serão analisados por SEC-MALS e Ressonância Magnética Nuclear (RMN), para avaliar seu grau de enovelamento e oligomerização. Por fim, os mutantes funcionais da HCP2 também serão testados para a HCP1, para analisar a estrutura e funcionalidade de ambas no sistema T6SS e na virulência da bactéria. Nossos dados irão ajudar no desenvolvimento de novos antibióticos com foco no sistema de secreção do tipo VI da K. pneumoniae. Referências bibliográficas : CASCALES E, CAMBILLAU C. (2012). Structural biology of type VI secretion systems. PloSOne. 1102-11; CIANFANELLI FR, MONLEZUN L, COULTHURT SJ. (2016). Aim, Load, Fire: The Type VI Secretion System, a Bacterial Nanoweapon. Trends Microbiol. 24(1):51-62;

Título do Evento: XLII Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural (JICTAC 2020 - Edição Especial) - Evento UFRJ
Título dos Anais do Evento: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

CAVALARI, Nadine Tonelli et al.. OTIMIZAÇÃO DA ESTABILIDADE IN VITRO DA PROTEÍNA HCP DO SISTEMA DE SECREÇÃO DO TIPO VI DE KLEBSIELLA PNEUMONIAE PARA ESTUDOS ESTRUTURAIS E FUNCIONAIS.. In: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural. Anais...Rio de Janeiro(RJ) UFRJ, 2021. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/jgmictac/318627-OTIMIZACAO-DA-ESTABILIDADE-IN-VITRO-DA-PROTEINA-HCP-DO-SISTEMA-DE-SECRECAO-DO-TIPO-VI-DE-KLEBSIELLA-PNEUMONIAE-PA. Acesso em: 07/09/2025