Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural

CARACTERIZAÇÃO ESTRUTURAL DA PROTEÍNA DE ENVELOPE DO VÍRUS ZIKA ATRAVÉS DE EXPRESSÃO HETERÓLOGA EM ESCHERICHIA COLI

Publicado em 22/03/2021 - ISBN: 978-65-5941-128-3

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Título do Trabalho
CARACTERIZAÇÃO ESTRUTURAL DA PROTEÍNA DE ENVELOPE DO VÍRUS ZIKA ATRAVÉS DE EXPRESSÃO HETERÓLOGA EM ESCHERICHIA COLI
Autores
  • Suellen Souza Barros de Moura
  • Antonio Leonardo Freitas Casalinho
  • FABIANA PESTANA ALBERNAZ
  • Vanessa Lopes de Azevedo Braga
  • Ana Paula Canedo Valente
  • Cristiane Dinis Ano Bom
  • Andre Gomes
  • Andréa Cheble de Oliveira
Modalidade
Resumo apresentação oral curta
Área temática
Centro de Ciências da Saúde (CCS)/Bioquímica
Data de Publicação
22/03/2021
País da Publicação
Brasil
Idioma da Publicação
Português
Página do Trabalho
https://www.even3.com.br/anais/jgmictac/316883-caracterizacao-estrutural-da-proteina-de-envelope-do-virus-zika-atraves-de-expressao-heterologa-em-escherichia-co
ISBN
978-65-5941-128-3
Palavras-Chave
Vírus Zika, Proteína de Envelope
Resumo
O vírus Zika pertence à família Flaviviridae e é transmitido aos seres humanos através da picada de mosquitos infectados do gênero Aedes. Durante o surto que aconteceu no Brasil, em 2015, houve o aumento no número de casos de neuropatias graves e malformações congênitas relacionados à infecção pelo Zika que, então, passaram a ser conhecidas por “Síndrome Congênita do Zika”. O genoma do vírus codifica uma poliproteína de cerca de 3.400 resíduos de aminoácidos, que é clivada em 10 proteínas, sendo 3 delas estruturais e 7 não estruturais. A glicoproteína E apresenta 3 domínios (membrana, DI, DII e DIII) e é de extrema importância para a infecção viral, na interação do vírus com o hospedeiro, principal alvo de anticorpos neutralizantes e pela fusão da membrana da célula, e nela também se encontram os peptídeos de fusão e o sítio de N-Glicosilação. Neste contexto, este trabalho tem como objetivo a caracterização estrutural e da dinâmica da proteína de envelope do vírus Zika. Embora a literatura descreva dados relevantes sobre a estrutura dessa proteína, ainda é preciso o estudo da dinâmica, uma vez que a flutuação de estrutura da proteína de envelope em todas as etapas de infecção pelo Zika pode ser crucial no desenvolvimento de um fármaco eficiente contra a infecção. Para isso, utilizamos duas construções distintas do vetor pET21a para expressar, em bactéria E. coli, na sua forma inteira (proteína E) e de uma construção com apenas os domínios DI e DII (proteína DIDII), ambas fusionadas a uma cauda de 6 histidinas (6x his) para facilitar a purificação. Após diversos testes, concluímos que o melhor protocolo de expressão deve realizar o crescimento das bactérias a 25°C e a indução da expressão a 15°C O/N com 0,5 M de IPTG. Após a lise celular, as proteínas E e DIDII se encontram em corpos de inclusão, sendo extraídas em tampão contendo 8 M de ureia. Após uma etapa de purificação por troca iônica, seguida de cromatografia de afinidade a níquel, ambas as proteínas apresentaram rendimento e grau de pureza satisfatórios para estudos de caracterização de sua estrutura secundária e terciária. Esses estudos estão sendo realizados através de técnicas como ressonância magnética nuclear, espectroscopia de fluorescência e dicroísmo circular. Através dessas técnicas espera-se atingir resultados mais aprofundados sobre a dinâmica estrutural proteica, complementando a literatura existente com relação à estrutura do cristal, já que são dados em solução, e possibilitando a investigação de futuros fármacos contra a infecção. Referências Bibliográficas BAZ M, Boivin G. Antiviral Agents in Development for Zika Virus Infections. Pharmaceuticals (Basel). 29;12(3):101, 2019 (Dick et al., 1952) OLIVEIRA, W. K., Carmo, E. H., et al., Zika Virus Infection and Associated Neurologic Disorders in Brazil. New England Journal of Medicine, 376(16), 1591–1593. 2017 SIROHI, D., Chen, Z., Sun, L., Klose, T., Pierson, T. C., Rossmann, M. G., & Kuhn, R. J., The 3.8 A resolution cryo-EM structure of Zika virus. Science, 352(6284), 467–470, 2016
Título do Evento
XLII Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural (JICTAC 2020 - Edição Especial) - Evento UFRJ
Título dos Anais do Evento
Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural
Nome da Editora
Even3
Meio de Divulgação
Meio Digital

Como citar

MOURA, Suellen Souza Barros de et al.. CARACTERIZAÇÃO ESTRUTURAL DA PROTEÍNA DE ENVELOPE DO VÍRUS ZIKA ATRAVÉS DE EXPRESSÃO HETERÓLOGA EM ESCHERICHIA COLI.. In: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural. Anais...Rio de Janeiro(RJ) UFRJ, 2021. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/jgmictac/316883-CARACTERIZACAO-ESTRUTURAL-DA-PROTEINA-DE-ENVELOPE-DO-VIRUS-ZIKA-ATRAVES-DE-EXPRESSAO-HETEROLOGA-EM-ESCHERICHIA-CO. Acesso em: 16/07/2025

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