DESENVOLVIMENTO DE MODELOS EXPERIMENTAIS PARA ESTUDOS DE HEMOSTASIA E INFLAMAÇÃO DURANTE A INFECÇÃO POR ARBOVIRUS

Aline Silva Gomes Pereira; Sharton Vinicius Antunes Coelho; Matheus Macedo Lopes Vasques Monteiro; julio scharfstein; Claudia Lucia Martins da Silva; Luciana Barros de Arruda

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Trabalho

Título do Trabalho

DESENVOLVIMENTO DE MODELOS EXPERIMENTAIS PARA ESTUDOS DE HEMOSTASIA E INFLAMAÇÃO DURANTE A INFECÇÃO POR ARBOVIRUS

Autores

Aline Silva Gomes Pereira
Sharton Vinicius Antunes Coelho
Matheus Macedo Lopes Vasques Monteiro
julio scharfstein
Claudia Lucia Martins da Silva
Luciana Barros de Arruda

Modalidade

Resumo apresentação oral curta

Área temática

Centro de Ciências da Saúde (CCS)/Virologia

Data de Publicação

22/03/2021

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/jgmictac/316048-desenvolvimento-de-modelos-experimentais-para-estudos-de-hemostasia-e-inflamacao-durante-a-infeccao-por-arbovirus

ISBN

978-65-5941-128-3

Palavras-Chave

Arbovirus, patogênese

Resumo

A infecção pelos arbovirus Dengue (DENV), Zika (ZIKV) e Chikungunya (CHIKV) levam a disfunções do endotélio vascular que podem resultar em extravasamento de vírus e células para os tecidos; distúrbios de coagulação e extravasamento de plasma; e potencialização da resposta inflamatória. Nós investigamos diferentes aspectos da interação célula endotelial-arboviroses em modelos in vitro. A extrapolação dos nossos achados para estudos de patogênese in vivo, no entanto, é limitada pela restrição da replicação viral em camundongos imunocompetentes. O objetivo do presente projeto é estabelecer modelos ex vivo de replicação de DENV, ZIKV e CHIKV em células primárias de roedores, visando sua utilização em futuras estratégias de implante celular para estudos de patogênese e terapia in vivo. Foram utilizadas duas abordagens. Na primeira utilizamos células endoteliais (EC) diferenciadas a partir de vaso mesentérico de camundongos imunodeficientes AG129 (IFNAR/IFNGRko) ou imunocompetentes C57BL/6 e SV129. A segunda abordagem foi feita utilizando-se fibroblastos primários isolados da bolsa da bochecha de Syrian hamsters, cuja análise de permeabilidade vascular em estudos farmacológicos está bem estabelecida pelo grupo. As células isoladas foram inoculadas com DENV (cepa 16681), ZIKV (cepas da linhagem asiática PE243 ou da linhagem africana MR766) ou CHIKV, utilizando multiplicidades de infecção (MOI) de 0.1, 1, e 10. Durante 7 dias, as células foram analisadas diariamente ao microscópio óptico para observação de efeito citopático (CPE) e os sobrenadantes recolhidos para avaliação da liberação de partículas infecciosas por ensaios de plaque. No modelo murino, nós observamos que as ECs isoladas de camundongos AG129 foram permissivas a infecção por DENV, ZIKV e CHIKV, particularmente nos MOIs de 0.1. A infecção com DENV ou ZIKV (PE243 e MR766) induziu efeito citopático (CPE) moderado e não houve evidencia de morte celular até 144h após a infecção (hpi). A replicação com DENV atingiu seu pico em 48h, com titulo de 105 PFU/ml, em MOI de 0.1. Já infecção com ZIKVPE243 atingiu seu pico após 72h, com título médio de 5x105, enquanto a infecção com ZIKVMR766 gerou até 5x106 PFU/ml. Nas ECs infectadas com CHIKV, foi observado intenso CPE já em 24hpi, e o experimento foi interrompido após 48h, quando o título viral reduziu de 106 (24hpi) para 105 (48hpi) PFU/ml. Já as ECs isoladas de camundongos C57Bl/6 e Sv129 só foram susceptíveis a infecção por CHIKV, mas não por DENV ou ZIKV. Foi observado também intenso CPE e morte celular já em 24hpi, quando o título viral atingiu 106PFU/ml. Resultados semelhantes foram observados após infecção de fibroblastos de hamsters, com alta replicação e indução de CPE por CHIKV. Já os fibroblastos infectados por DENV ou ZIKV não apresentaram CPE e o título de partículas liberadas foi muito semelhante ao input. Experimentos futuros, utilizando MOIs mais baixos serão realizados para melhor investigar a replicação de DENV e ZIKV nesse modelo celular. Em conjunto, nossos resultados demonstraram que EC primárias murinas e fibroblastos de hamster são susceptíveis a infecção por CHIKV, indicando que ambos os modelos de roedores podem ser utilizados para estudos do papel vascular nessa infecção. Com relação a DENV e ZIKV, apenas as EC de camundongos imunodeficientes foram permissivas a infecção, e poderão ser usadas em modelos quiméricos em camundongos imunocompetentes para investigar o papel particular do endotélio na patogênese dessas infecções.

Título do Evento: XLII Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural (JICTAC 2020 - Edição Especial) - Evento UFRJ
Título dos Anais do Evento: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

PEREIRA, Aline Silva Gomes et al.. DESENVOLVIMENTO DE MODELOS EXPERIMENTAIS PARA ESTUDOS DE HEMOSTASIA E INFLAMAÇÃO DURANTE A INFECÇÃO POR ARBOVIRUS.. In: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural. Anais...Rio de Janeiro(RJ) UFRJ, 2021. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/jgmictac/316048-DESENVOLVIMENTO-DE-MODELOS-EXPERIMENTAIS-PARA-ESTUDOS-DE-HEMOSTASIA-E-INFLAMACAO-DURANTE-A-INFECCAO-POR-ARBOVIRUS. Acesso em: 07/05/2025