GERAÇÃO DE CÉLULAS-TRONCO HUMANAS DE PLURIPOTÊNCIA INDUZIDA (IPS) PARA ESTUDO IN VITRO DA CARDIOMIOPATIA PRKAG2

Gabriella Anzanelo Veloni Brito; Raiana Andrade Quintanilha Barbosa; Izabella Pereira da Silva Bezerra; Eduardo Back Sternick - colaborador; Antonio Carlos Campos de Carvalho; Tais Hanae Kasai Brunswick

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Trabalho

Título do Trabalho

GERAÇÃO DE CÉLULAS-TRONCO HUMANAS DE PLURIPOTÊNCIA INDUZIDA (IPS) PARA ESTUDO IN VITRO DA CARDIOMIOPATIA PRKAG2

Autores

Gabriella Anzanelo Veloni Brito
Raiana Andrade Quintanilha Barbosa
Izabella Pereira da Silva Bezerra
Eduardo Back Sternick - colaborador
Antonio Carlos Campos de Carvalho
Tais Hanae Kasai Brunswick

Modalidade

Resumo apresentação oral padrão

Área temática

Centro de Ciências da Saúde (CCS)/Biofísica

Data de Publicação

22/03/2021

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/jgmictac/315614-geracao-de-celulas-tronco-humanas-de-pluripotencia-induzida-(ips)-para-estudo-in-vitro-da-cardiomiopatia-prkag2

ISBN

978-65-5941-128-3

Palavras-Chave

Células-tronco de pluripotência induzida, cardiomiopatia, PRKAG2

Resumo

Introdução: A cardiomiopatia PRKAG2 é uma síndrome genética autossômica dominante causada por uma mutação no gene PRKAG2 (Proteína cinase gama 2 ativada por AMP), descrita por estar associada ao fenótipo de pré-excitação ventricular, armazenamento de glicogênio e hipertrofia ventricular. Hipótese: A hipótese que sustenta esse projeto é de que a geração de células-tronco de pluripotência induzida (iPS) de pacientes com a síndrome PRKAG2 irá fornecer o recurso ideal para posterior modelagem da doença in vitro, uma vez que podem ser diferenciadas em cardiomiócitos, facilitando o entendimento de mecanismos ainda não completamente elucidados para essa doença. Objetivos: Os objetivos do presente trabalho foram realizar a identificação de pacientes portadores da síndrome de PRKAG2 e a geração de suas iPS. Métodos: Este projeto foi aprovado pelo CEP local sob o número 27044614.3.0000.5272, sendo dispensado de análise pela CONEP. Até o momento, o presente estudo recrutou uma paciente diagnosticada com a síndrome PRKAG2 e um familiar não portador da síndrome, estabelecido como controle nesse projeto, através de parceria com o Instituto Biocor, em Minas Gerais. Amostras sanguíneas dos pacientes foram analisadas por sequenciamento de Sanger para confirmação do diagnóstico clínico e investigação de variante no gene PRKAG2. Em seguida, iniciou-se a geração de iPS através de reprogramação gênica de células sanguíneas provenientes dos pacientes e realizada em 4 etapas, sendo elas: isolamento de células mononucleares do sangue periférico, enriquecimento da cultura em eritroblastos com confirmação por citometria de fluxo, transdução de fatores de pluripotência com Sendai vírus e seleção e expansão das colônias de iPS geradas. Resultados Preliminares: Verificou-se que a paciente selecionada é portadora de mutação missense no gene PRKAG2 (c.1203C>A, His401Gln), variante gênica ainda não reportada na literatura. Como esperado, não foram identificadas variantes patogênicas no gene PRKAG2 no controle selecionado. O processo de hematopoese de estresse de células mononucleares de sangue periférico dos pacientes gerou enriquecimento na fração de eritroblastos entre o 6º e 12º dias de cultura. Por citometria de fluxo, confirmamos a presença de 88,6% de células CD36+ e CD71+, fenótipo característico dos eritroblastos e prosseguimos o protocolo com a transdução viral com os fatores de pluripotência Klf4, Oct3/4, Sox2 e c-Myc. Conclusão parcial: O protocolo de reprogramação em andamento demonstra conformidade com o esperado na literatura, abrindo a possibilidade de obtenção de células tronco pluripotentes, consideradas importantes ferramentas para estudo de doenças.

Título do Evento: XLII Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural (JICTAC 2020 - Edição Especial) - Evento UFRJ
Título dos Anais do Evento: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

BRITO, Gabriella Anzanelo Veloni et al.. GERAÇÃO DE CÉLULAS-TRONCO HUMANAS DE PLURIPOTÊNCIA INDUZIDA (IPS) PARA ESTUDO IN VITRO DA CARDIOMIOPATIA PRKAG2.. In: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural. Anais...Rio de Janeiro(RJ) UFRJ, 2021. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/jgmictac/315614-GERACAO-DE-CELULAS-TRONCO-HUMANAS-DE-PLURIPOTENCIA-INDUZIDA-(IPS)-PARA-ESTUDO-IN-VITRO-DA-CARDIOMIOPATIA-PRKAG2. Acesso em: 19/06/2025