CARACTERIZAÇÃO ESTRUTURAL E DA INTERAÇÃO COM DNA DO DOMÍNIO RRM DA PROTEÍNA RICA EM GLICINA ATGRP7 DE ARABIDOPSIS THALIANA

Igor Guimarães Pascoal; Gustavo Dall'Olio Cardoso; Anderson de Sa Pinheiro

Título do Trabalho

Autores

Igor Guimarães Pascoal
Gustavo Dall'Olio Cardoso
Anderson de Sa Pinheiro

Modalidade

Resumo apresentação oral padrão

Área temática

Centro de Ciências Matemáticas e da Natureza (CCMN)/Bioquímica

Data de Publicação

22/03/2021

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/jgmictac/314908-caracterizacao-estrutural-e-da-interacao-com-dna-do-dominio-rrm-da-proteina-rica-em-glicina-atgrp7-de-arabidopsis

ISBN

978-65-5941-128-3

Palavras-Chave

AtGRP7, proteína rica em glicina, RRM, RMN

Resumo

AtGRP7 é uma proteína rica em glicina ligante de RNA de Arabidopsis thaliana que desempenha papel central no crescimento, desenvolvimento e resposta a estresse abiótico da planta. AtGRP7 consiste em um motivo de reconhecimento de RNA N-terminal (RRM) seguido de uma região intrinsecamente desordenada enriquecida em glicinas. Apesar da função geral de AtGRP7 na regulação da adaptação ao frio e do tempo de floração em A. thaliana, os mecanismos bioquímicos pelos quais essa proteína atua são amplamente desconhecidos. Assim, nosso trabalho visa caracterizar estrutural e funcionalmente esta proteína, fornecendo informações importantes sobre os mecanismos de tolerância ao estresse em plantas. As sequências de DNA que codificam a AtGRP7 íntegra e seu domínio RRM isolado foram clonadas no plasmídeo bacteriano RP1B, que fusiona a proteína de interesse a uma cauda N-terminal de seis histidinas seguida de um sítio de clivagem pela protease TEV. As construções AtGRP7 íntegra e AtGRP7-RRM foram transformadas em Escherichia coli BL21 DE3 e a expressão recombinante foi testada em duas temperaturas e concentrações de indutor diferentes. AtGRP7 e AtGRP7-RRM apresentaram expressão parcialmente solúvel tanto a 18 ºC quanto a 37 ºC. No entanto, um maior teor de proteína solúvel foi encontrado a 18 oC e IPTG 0,5 mM. AtGRP7-RRM foi purificado por uma combinação de afinidade de níquel e cromatografia de exclusão molecular. A afinidade de interação de AtGRP7-RRM com o oligonucleotídeo de DNA t7 foi investigada por espectroscopia de fluorescência. O espectro de emissão de fluorescência de AtGRP7-RRM apresentou emissão máxima em ~349 nm, indicando que o único resíduo de triptofano encontra-se exposto ao solvente. O aumento da concentração de ligante levou à supressão do espectro de fluorescência, sugerindo que o resíduo W17 faz parte do sítio de ligação. Estudos de Dicroísmo Circular (CD) de AtGRP7-RRM sugeriram um enovelamento típico de domínios RRM, contendo um misto de ?-hélices e folhas-ß. O espectro 1D 1H de RMN exibiu características de proteína enovelada com grande dispersão das ressonâncias amídicas. A partir de experimentos de RMN multidimensional de tripla ressonância foi possível assinalar mais de 90% dos aminoácidos da cadeia principal da proteína. Este é um passo importante que permitirá a resolução da estrutura da proteína em alta resolução utilizando RMN e, com isso, trará informações importante acerca do seu mecanismo de ação. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Heintzen C et al. (1997) AtGRP7, a nuclear RNA-binding protein as a component of a circadian-regulated negative feedback loop in Arabidopsis thaliana. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 8515-8520. 2. Kim JS et al. (2008) Glycine-rich RNA-binding protein 7 affects abiotic stress responses by regulating stomata opening and closing in Arabidopsis thaliana. Plant J. 55: 455-466.

Título do Evento: XLII Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural (JICTAC 2020 - Edição Especial) - Evento UFRJ
Título dos Anais do Evento: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

PASCOAL, Igor Guimarães; CARDOSO, Gustavo Dall'Olio; PINHEIRO, Anderson de Sa. CARACTERIZAÇÃO ESTRUTURAL E DA INTERAÇÃO COM DNA DO DOMÍNIO RRM DA PROTEÍNA RICA EM GLICINA ATGRP7 DE ARABIDOPSIS THALIANA.. In: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural. Anais...Rio de Janeiro(RJ) UFRJ, 2021. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/jgmictac/314908-CARACTERIZACAO-ESTRUTURAL-E-DA-INTERACAO-COM-DNA-DO-DOMINIO-RRM-DA-PROTEINA-RICA-EM-GLICINA-ATGRP7-DE-ARABIDOPSIS. Acesso em: 21/06/2025