Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural

CLONAGEM, PRODUÇÃO IN VITRO E CARACTERIZAÇÃO DE CECROPINA COM AÇÃO ANTIMICROBIANA A PARTIR DE UM INSETO PRAGA DE SOJA.

Publicado em 22/03/2021 - ISBN: 978-65-5941-128-3

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Título do Trabalho
CLONAGEM, PRODUÇÃO IN VITRO E CARACTERIZAÇÃO DE CECROPINA COM AÇÃO ANTIMICROBIANA A PARTIR DE UM INSETO PRAGA DE SOJA.
Autores
  • João Henrique de Oliveira Rangel
  • Patrick Henriques Petitinga
  • Marina Dutra Lanzaro
  • Luís Felipe Costa Ramos
  • Rodrigo Volcan Almeida
  • Cristiane Dinis Ano Bom
  • Dani Oliveira
Modalidade
Resumo apresentação oral curta
Área temática
Centro de Ciências Matemáticas e da Natureza (CCMN)/Bioquímica
Data de Publicação
22/03/2021
País da Publicação
Brasil
Idioma da Publicação
Português
Página do Trabalho
https://www.even3.com.br/anais/jgmictac/314266-clonagem-producao-in-vitro-e-caracterizacao-de-cecropina-com-acao-antimicrobiana-a-partir-de-um-inseto-praga-de-
ISBN
978-65-5941-128-3
Palavras-Chave
CecropinB, Expressão heteróloga, Anticarsia gemmatalis, Pragas agrícolas.
Resumo
Os insetos são animais que podem ser encontrados em diversos ambientes, sendo expostos a organismos patogênicos como fungos e bactérias. Uma vez que esses patógenos atravessam as barreiras físicas do inseto, o sistema imune inato atua na defesa do organismo por meio de respostas celulares e humorais. Peptídeos antimicrobianos são moléculas pequenas, produzidas por cascatas de sinalização imunológica que desenvolvem um papel importante e generalista nas defesas de insetos contra uma variedade de microrganismos (Brady et al., 2019). No presente trabalho, uma sequência de um peptídeo semelhante a Cecropin B (AgCecropB) foi identificada na lagarta da soja Anticarsia gemmatalis e clonada em um vetor plasmídeo bacteriano para posterior expressão heteróloga e testes antimicrobianos. Métodos: A sequência de AgCecropB (sem o peptídeo sinal) foi clonada no vetor plasmídeo pET-M30-MBP e inserida no hospedeiro de expressão Escherichia coli BL21 (DE3). A expressão foi induzida com IPTG e um peptídeo recombinante foi purificado usando duas etapas de cromatografia de afinidade com coluna Histrap (Wang et al., 2007). O peptídeo purificado foi submetido a espectrometria de massa de alta resolução (HRMS) e análises estruturais. Os testes antimicrobianos foram realizados com bactérias Gram-positivas (Bacillus thuringiensis) e Gram-negativas (Burkholderia kururiensis e E. coli) (Kim et al., 2010). Resultados: AgCecropB foi expresso em E. coli BL21 (DE3) a 28 ° C com IPTG 0,5 mM. O peptídeo recombinante foi purificado e enriquecido após as etapas de purificação. HRMS confirmou a massa molecular de AgCrecropB (4,6 kDa) e o ensaio de dicroísmo circular mostrou estrutura em a hélice na presença de SDS. AgCrecropB inibiu quase 50% do crescimento de bactérias (Gram positivas) B. thuringiensis. Conclusões: Este trabalho apresenta a primeira descrição de um peptídeo semelhante a cecropina B em A. gemmatalis e um peptídeo recombinante foi expresso usando uma plataforma bacteriana. Os dados confirmaram a estrutura secundária, conforme previsto para a família de peptídeos de cecropina. AgCecropB foi capaz de inibir o crescimento in vitro de B. thuringiensis. Brady, D. et al. Insect Cecropins, Antimicrobial Peptides with Potential Therapeutic Applications. Int. J. Mol. Sci. 2019 Nov;20(23):1-22. Kim, S.R. et al. Characterization and cDNA cloning of a cecropin-like antimicrobial peptide, papiliocin, from the swallowtail butterfly, Papilio xuthus. Mol. Cells. 2010 Mar; 29: 419–23. Wang, L. et al. Characterization and expression of a cecropin-like gene from Helicoverpa armigera. Comp Biochem Phys B. 2007 Dec;148(4):417–25, 2007.
Título do Evento
XLII Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural (JICTAC 2020 - Edição Especial) - Evento UFRJ
Título dos Anais do Evento
Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural
Nome da Editora
Even3
Meio de Divulgação
Meio Digital

Como citar

RANGEL, João Henrique de Oliveira et al.. CLONAGEM, PRODUÇÃO IN VITRO E CARACTERIZAÇÃO DE CECROPINA COM AÇÃO ANTIMICROBIANA A PARTIR DE UM INSETO PRAGA DE SOJA... In: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural. Anais...Rio de Janeiro(RJ) UFRJ, 2021. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/jgmictac/314266-CLONAGEM-PRODUCAO-IN-VITRO-E-CARACTERIZACAO-DE-CECROPINA-COM-ACAO-ANTIMICROBIANA-A-PARTIR-DE-UM-INSETO-PRAGA-DE-. Acesso em: 02/05/2025

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