ESTUDOS ESTRUTURAIS DA RIBOSE-5-FOSFATO ISOMERASE B DE TRYPANOSOMA CRUZI

Thamires Moreira; Bruna Martins Alves; Leonardo Bartkevihi; Beatriz Rosa Penna; José Ricardo Murari Pires; Fabio Ceneviva Lacerda Almeida; Dani Oliveira; Cristiane Dinis Ano Bom

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Trabalho

Título do Trabalho

ESTUDOS ESTRUTURAIS DA RIBOSE-5-FOSFATO ISOMERASE B DE TRYPANOSOMA CRUZI

Autores

Thamires Moreira
Bruna Martins Alves
Leonardo Bartkevihi
Beatriz Rosa Penna
José Ricardo Murari Pires
Fabio Ceneviva Lacerda Almeida
Dani Oliveira
Cristiane Dinis Ano Bom

Modalidade

Resumo apresentação oral curta

Área temática

Centro de Ciências Matemáticas e da Natureza (CCMN)/Bioquímica

Data de Publicação

22/03/2021

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/jgmictac/313859-estudos-estruturais-da-ribose-5-fosfato-isomerase-b-de-trypanosoma-cruzi

ISBN

978-65-5941-128-3

Palavras-Chave

Estrutura, doença de Chagas, enzimas

Resumo

As doenças negligenciadas são um grave problema de saúde pública. Diversos agentes infecciosos e parasitas são endêmicos das regiões tropical e subtropical, entre eles, o Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, responsável por cerca de 12 mil mortes por ano na América Latina. Acredita-se que a alta taxa de mortalidade da doença esteja associada a ausência de diagnóstico precoce, ineficácia e efeitos adversos causados pelos medicamentos utilizados durante a fase crônica. Desta forma, a caracterização de novos alvos moleculares é essencial para o desenvolvimento de terapias com maior especificidade e eficácia. Neste contexto, a ribose-5- fosfato isomerase (Rpi) é uma enzima essencial no crescimento celular e não possui homólogos em humanos. Há duas famílias de Rpi: a RpiA encontrada em eucariotos, e a RpiB presente em procariotos, eucariotos basais e fungos. A RpiB é capaz de catalisar a interconversão entre D-ribulose-5-fosfato e D-ribose-5-fosfato, sendo importante para o anabolismo celular, atuando no ramo não-oxidativo do ciclo das pentoses fosfato, e resultando na síntese de nucleotídeos e cofatores. Desta forma, a RpiB é considerada um potencial alvo para drogas. O objetivo principal deste projeto é determinar a estrutura e a dinâmica da proteína RpiB de T. cruzi (TcRpiB) por Ressonância Magnética Nuclear (RMN) e identificar fragmentos ligantes para esta enzima. Assim, o gene da TcRpiB foi clonado no plasmídeo pET-28a, fusionado a uma cauda de histidina e transformado em E. coli BL21 (DE3). A melhor condição para a expressão da proteína em meio Luria Bertani (LB) e mínimo (M9) foi obtida a 37°C com indução com 1 mM de isopropil-b-D-1-tio-galactopiranosideo (IPTG) em D.O.600nm de 0,6 por 4 horas. A amostra foi ressuspendida em tampão 50 mM Tris-HCl pH 8,0, 300 mM de NaCl, 10 mM de imidazol e 1 mM de PMSF e lisada por sonicação. A porção solúvel contendo a proteína TcRpiB foi purificada através de cromatografia de afinidade a níquel e eluída em um gradiente de imidazol. Posteriormente, a proteína foi submetida a cromatografia de exclusão molecular, onde foi observado que a mesma encontrava-se na forma dimérica. Os resultados das purificações foram monitorados por SDS-PAGE 15%. Para os estudos estruturais por RMN, a proteína foi isotopicamente marcada (15N) e perdeuterada (2H e 15N) visando o seu assinalamento e determinação estrutural. Os espectros 15N-TROSY-HSQC mostraram que a proteína se encontra enovelada e indicam um equilíbrio dímero-tetrâmero, o que leva a necessidade de ajustes para possibilitar o assinalamento dos resíduos. Ensaios de atividade enzimática da TcRpiB foram realizados por RMN mostrando baixa atividade. Os estudos estruturais e da dinâmica serão essenciais para ampliar o entendimento funcional da enzima como também para a triagem de compostos líderes com atividade inibitória para o tratamento da doença de Chagas.

Título do Evento: XLII Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural (JICTAC 2020 - Edição Especial) - Evento UFRJ
Título dos Anais do Evento: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

MOREIRA, Thamires et al.. ESTUDOS ESTRUTURAIS DA RIBOSE-5-FOSFATO ISOMERASE B DE TRYPANOSOMA CRUZI.. In: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural. Anais...Rio de Janeiro(RJ) UFRJ, 2021. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/jgmictac/313859-ESTUDOS-ESTRUTURAIS-DA-RIBOSE-5-FOSFATO-ISOMERASE-B-DE-TRYPANOSOMA-CRUZI. Acesso em: 27/05/2025