ESTRATÉGIAS DE GERAÇÃO DE CÉLULAS GANGLIONARES DA RETINA A PARTIR DA GLIA DE MÜLLER

Thais Marinho; Fernando Cesar Dantas Ferreira; Marcele Ribeiro Valente; Viviane Medeiros Oliveira Valença; Rodrigo Alves Portela Martins; Rafael Linden; Mariana S. Silveira

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Trabalho

Título do Trabalho

ESTRATÉGIAS DE GERAÇÃO DE CÉLULAS GANGLIONARES DA RETINA A PARTIR DA GLIA DE MÜLLER

Autores

Thais Marinho
Fernando Cesar Dantas Ferreira
Marcele Ribeiro Valente
Viviane Medeiros Oliveira Valença
Rodrigo Alves Portela Martins
Rafael Linden
Mariana S. Silveira

Modalidade

Resumo apresentação oral curta

Área temática

Centro de Ciências da Saúde (CCS)/Neurobiologia

Data de Publicação

22/03/2021

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/jgmictac/312860-estrategias-de-geracao-de-celulas-ganglionares-da-retina-a-partir-da-glia-de-muller

ISBN

978-65-5941-128-3

Palavras-Chave

Glia de Müller, retina, reprogramação celular, células ganglionares

Resumo

A retina de vertebrados é composta por seis tipos neuronais e um tipo glial majoritário, a glia de Müller (MG). Em circunstâncias de lesão, esse tipo glial apresenta potencial endógeno proliferativo e regenerativo que varia entre diferentes espécies de vertebrados. A MG em teleósteos, como peixe-zebra, possui uma extensa capacidade proliferativa e regenerativa em resposta a dano, reestabelecendo todos os tipos celulares. A MG de mamíferos, entretanto, apresenta potencial proliferativo e de diferenciação limitado. Dados prévios do grupo mostraram que a superexpressão de Klf4 em progenitores tardios, que compartilham propriedades com a glia de Müller, leva após 39 h à ativação de um programa molecular de geração de RGCs, fora da sua janela temporal, e após 10 dias as RGCs induzidas (iRGCs) apresentam características morfológicas, e expressam marcadores específicos deste tipo celular, como RBPMS. Neste trabalho investigou-se o potencial reprogramador do fator de transcrição Klf4 na MG de ratos. Para tal, foi aplicada eletroporação in vivo e um sistema de superexpressão condicional do Klf4 ex vivo. Estas estratégias envolveram um protocolo de cultivo de explantes de retina. Retinas de ratos com 10 dias de idade (P10) foram dissecadas e cortadas em explantes. Em seguida, foram mantidas sob agitação orbital a 37ºC em meio DMEM suplementado com N2, Soro Fetal Bovino, L-glutamina, penicilina, estreptomicina e EGF (fator de crescimento da epiderme). Às culturas foi adicionado diariamente o análogo de timidina BrdU e estas foram analisadas no tempo de 6 e 12 dias ex vivo (DEV), comparados ao dia 0. Através da análise por imunofluorescência das células BrdU positivas (BrdU+), observamos que 30% das células da MG proliferam, além destas retinas apresentarem um aumento da expressão de GFAP, marcador de ativação glial. Quando retinas foram eletroporadas in vivo com plasmídeos para expressão condicional de Klf4 na MG, foi observado, com a aplicação deste modelo de cultivo, um aumento no percentual de células derivadas da MG que expressaram TUBB3 (beta III-tubulina), marcador neuronal expresso em células ganglionares na retina madura, e NEUN, marcador de células amácrinas e ganglionares. Esses resultados apontam que o Klf4 pode ter um papel reprogramador em células gliais de Müller. No entanto, visto que o modelo de cultivo apresenta limitações associadas à desorganização histológica após longos períodos e impossibilidade de analisar a projeção das iRGCs, desenhamos uma abordagem in vivo com vetor viral adenovírus associado (AAV ShH10) que apresenta tropismo pela MG e no qual a expressão de Klf4 é regulada por promotor específico deste tipo celular. Em resumo, o estabelecimento desses modelos é de grande importância para futuras padronizações de protocolos de reprogramação celular da MG que objetivam reativar seu potencial regenerativo em mamíferos para reestabelecer populações neuronais perdidas durante condições patológicas, como no glaucoma.

Título do Evento: XLII Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural (JICTAC 2020 - Edição Especial) - Evento UFRJ
Título dos Anais do Evento: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

MARINHO, Thais et al.. ESTRATÉGIAS DE GERAÇÃO DE CÉLULAS GANGLIONARES DA RETINA A PARTIR DA GLIA DE MÜLLER.. In: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural. Anais...Rio de Janeiro(RJ) UFRJ, 2021. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/jgmictac/312860-ESTRATEGIAS-DE-GERACAO-DE-CELULAS-GANGLIONARES-DA-RETINA-A-PARTIR-DA-GLIA-DE-MULLER. Acesso em: 31/08/2025