INVESTIÇÃO DO PAPEL DA PROTEÍNA TROMBOSPONDINA-1 NO PERFIL DE PRODUÇÃO DE COLÁGENO, COMO ALTERNATIVA DE PROTOCOLOS DE  DIFERENCIAÇÃO CONDROGÊNICA

Tathiana Proença Pampolha; Renata Akemi Morais Matsui; Leandra Santos Baptista

Título do Trabalho

INVESTIÇÃO DO PAPEL DA PROTEÍNA TROMBOSPONDINA-1 NO PERFIL DE PRODUÇÃO DE COLÁGENO, COMO ALTERNATIVA DE PROTOCOLOS DE DIFERENCIAÇÃO CONDROGÊNICA

Autores

Tathiana Proença Pampolha
Renata Akemi Morais Matsui
Leandra Santos Baptista

Modalidade

Resumo apresentação oral padrão

Área temática

Campus Duque de Caxias/Biotecnologia

Data de Publicação

22/03/2021

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/jgmictac/312428-investicao-do-papel-da-proteina-trombospondina-1-no-perfil-de-producao-de-colageno-como-alternativa-de-protocolo

ISBN

978-65-5941-128-3

Palavras-Chave

Engenharia de Cartilagem, Células-tronco derivadas do tecido adiposo, cultivo celular tridimensional, Proteína Trombospondina-1

Resumo

A proteína trombospondina - 1 (TSP-1) possui um papel importante em processos que permeiam a condrogênese, pois tem sido descrita como potente inibidor angiogênico e hipertrófico(Gelse et al.,2011; Lawler et al.,2002). O objetivo deste trabalho é investigar a relação da proteína trombospondina-1 (TSP-1) em esferoides, gerados a partir de células-tronco derivadas do tecido adiposo (ASCs), e sua eficácia na diferenciação condrogênica em normoxia, assim como seu papel na síntese de colágeno. As células foram descongeladas e a suspensão celular foi plaqueada em garrafas de cultura em meio DMEM acrescido de 10% de SFB (Gibco) suplementado com 100 U/mL de penicilina sódica (LGC) e 100 µg/mL de estreptomicina (LGC). As garrafas de cultura foram mantidas em estufa úmida a 37ºC com 5% de CO2. Para a cultura dos esferoides, foi plaqueado uma suspensão celular contendo 2x10E6 células, em um hidrogel de agarose ultrapura 2% (Invitrogen) micromoldado não-aderente. Cada esferoide é formado separadamente a partir de cada ressecção, totalizando ao final, 81 esferoides gerados a partir de um único hidrogel de agarose micromoldada. O meio de cultura no qual os esferoides são mantidos é composto por DMEM (Sigma), ácido ascórbico 50 µg/ml, albumina humana 1,25 µg/ml, penicilina sódica 100 U/mL (LGC) e 100 µg/mL de estreptomicina (LGC). Para este ensaio, foram realizadas 3 condições experimentais, além do controle, esferoides condicionados em meio de indução condrogênica contendo 10 µg/mL TGF- ß3 e a outra condição, contendo 10 µg/mL TGF- ß3 e 10 µg/mL de proteína TSP-1. O meio de cultura foi trocado duas vezes por semana. Foram feita as análises de ensaios de compressão, pelo equipamento Microsquisher (Cell Scale, Waterloo, Canadá) para obter o módulo de Young. Para análise histológica foi usado o kit de Hematoxilina e Eosina (Sigma) e para análise Imunohistoquímica o protocolo foi seguido de acordo com o fabricante para os anticorpos: agrecana, TSP-1, Colágeno tipo II e Colágeno tipo X. No nosso modelo, o Módulo de Young que mais se aproxima da cartilagem humana (1,76 MegaPascal) é na cinética de 5 semanas com TGF- ß3, sendo o TGF-ß3 um fator de crescimento que potencializa a diferenciação da cartilagem, bem descrito na literatura, ficando evidente sua importância na metodologia. A análise de Hematoxilina e Eosina foi satisfatória, pois foi possível observar e analisar toda morfologia dos esferoides, caracterizados por uma grande síntese de matriz extracelular. Já nas análises de Imunohistoquímica, a cinética de 3 semanas em cultivo foi mais satisfatório na condição de esferoides que levaram a proteína TSP-1 suplementada no meio e sem a presença de TGF-ß3, devido a intensa marcação de agrecana, TSP-1 e Colágeno tipo 2. Os esferoides revelaram componentes típicos da matriz extracelular da cartilagem, quando cultivados em meio incorporado com a proteína TSP-1. O estudo abre a possibilidade do potencial uso dessa proteína para intensificar protocolos para uso na engenharia de cartilagem. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS LAWLER , Patrick R. et al. Molecular Basis for the Regulation of Angiogenesis by Thrombospondin-1 and -2. Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine, 2012. GELSE, K et al. Thrombospondin-1 Prevents Excessive Ossification in Cartilage Repair Tissue Induced by Osteogenic Protein-1. Tissue Engineering Part A, 2011. v. 17, ed. 15-16.

Título do Evento: XLII Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural (JICTAC 2020 - Edição Especial) - Evento UFRJ
Título dos Anais do Evento: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

PAMPOLHA, Tathiana Proença; MATSUI, Renata Akemi Morais; BAPTISTA, Leandra Santos. INVESTIÇÃO DO PAPEL DA PROTEÍNA TROMBOSPONDINA-1 NO PERFIL DE PRODUÇÃO DE COLÁGENO, COMO ALTERNATIVA DE PROTOCOLOS DE DIFERENCIAÇÃO CONDROGÊNICA.. In: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural. Anais...Rio de Janeiro(RJ) UFRJ, 2021. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/jgmictac/312428-INVESTICAO-DO-PAPEL-DA-PROTEINA-TROMBOSPONDINA-1-NO-PERFIL-DE-PRODUCAO-DE-COLAGENO-COMO-ALTERNATIVA-DE-PROTOCOLO. Acesso em: 11/05/2025