INVESTIGAÇÃO DA INDUÇÃO DE AUTOFAGIA POR LISTERIA MONOCYTOGENES

Thalita Santos de Moraes de Farias; Mariana da Silva Siqueira; Leo Travassos

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Trabalho

Título do Trabalho

INVESTIGAÇÃO DA INDUÇÃO DE AUTOFAGIA POR LISTERIA MONOCYTOGENES

Autores

Thalita Santos de Moraes de Farias
Mariana da Silva Siqueira
Leo Travassos

Modalidade

Resumo apresentação oral padrão

Área temática

Centro de Ciências da Saúde (CCS)/Imunologia

Data de Publicação

22/03/2021

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/jgmictac/312093-investigacao-da-inducao-de-autofagia-por-listeria-monocytogenes

ISBN

978-65-5941-128-3

Palavras-Chave

Autofagia, Listeria, mTOR, ULK1

Resumo

A autofagia consiste em um processo homeostático altamente conservado que direciona constituintes celulares, como agregados proteicos e organelas disfuncionais, à via de degradação lisossomal. Em mamíferos, esse processo é regulado pelo complexo ULK1 (uncoordinated 51-like kinase1), um importante regulador do início da autofagia, podendo ser inibido diretamente pelo complexo mTORC1. Sinais upstream à ULK1 e mTORC1, como por exemplo a privação nutricional e a presença de patógenos intracelulares, são suficientes para estimular a maquinaria autofágica. Neste último caso, a autofagia atua como um importante braço efetor do sistema imune inato, contribuindo para a eliminação destes patógenos (LEVINE et al., 2011). Uma etapa crucial deste processo é o reconhecimento da presença de bactérias intracelulares pelo maquinário autofágico. Isto se dá pelo reconhecimento de ubiquitina (Ub) na superfície do patógeno pelo adaptador autofágico SQSTM1/p62 (p62) (PERRIN et al., 2004). Embora várias proteínas relacionadas à ubiquitinação e a detecção de Ub por diversos adaptadores tenham sido descritas recentemente, pouco se sabe sobre os eventos que disparam estas etapas. Neste trabalho, investigamos o papel de ULK1 no reconhecimento de bactérias intracelulares pelo maquinário autofágico. Dados da literatura demonstram que ULK1 desempenha um papel central na autofagia induzida por privação de aminoácidos e de glicose, integrando sinais de sensores como mTOR e AMPK, respectivamente (WIRTH et al., 2013). A fim de avaliar se a infecção por Listeria monocytogenes dispara respostas de privação nutricional, infectamos fibroblastos de camundongos selvagens por 1, 2, 4 e 8 horas e realizamos a quantificação da redução da colocalização de mTOR e LAMP1, um indicativo da inibição da atividade de mTOR. Nossos resultados mostram uma redução progressiva da colocalização de mTOR e LAMP1, sugerindo que a infecção por L. monocytogenes dispara um processo de privação nutricional. Em seguida, infectamos fibroblastos de camundongos selvagens ou nocautes para ULK1 por 1, 2, 4 e 8h com a bactéria Listeria monocytogenes e realizamos imunomarcação para Ub e p62, para quantificação (por microscopia confocal) do número de bactérias marcadas. Nossos resultados mostraram que fibroblastos de animais nocautes para ULK1 apresentam significativa redução no número de bactérias positivas para Ub e p62. Este conjunto de resultados preliminares sugere que a privação nutricional disparada por L. monocytogenes é o sinal que inicia o reconhecimento da bactéria para a consequente degradação lisossomal. Nossos próximos passos envolvem a realização de Western Blotting para analisar a atividade de alvos diretos de mTORC1, como 4EBP1 e S6K1. Além disso, pretendemos mitigar a via de sinalização induzida a partir de privação nutricional, com foco na expressão de GCN2 e na possível formação de grânulos de estresse em fibroblastos infectados por L. monocytogenes. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS LEVINE, B., MIZUSHIMA, N., VIRGIN, H. Autophagy in immunity and inflammation. Nature, 2011. vol. 469, p. 323-335. PERRIN, A., JIANG, X., BIRMINGHAM, C., SO, N., BRUMELL, J. Recognition of bacteria in the cytosol of mammalian cells by the ubiquitin system. Current Biology, 2004. vol. 14, p. 806-811. WIRTH, M., JOACHIM, J.,TOOZE, S. Autophagosome Formation- The role of ULK1 and Beclin1-PI3KC3 complexes in setting the stage. Seminars in Cancer Biology, 2013.

Título do Evento: XLII Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural (JICTAC 2020 - Edição Especial) - Evento UFRJ
Título dos Anais do Evento: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

FARIAS, Thalita Santos de Moraes de; SIQUEIRA, Mariana da Silva; TRAVASSOS, Leo. INVESTIGAÇÃO DA INDUÇÃO DE AUTOFAGIA POR LISTERIA MONOCYTOGENES.. In: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural. Anais...Rio de Janeiro(RJ) UFRJ, 2021. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/jgmictac/312093-INVESTIGACAO-DA-INDUCAO-DE-AUTOFAGIA-POR-LISTERIA-MONOCYTOGENES. Acesso em: 22/07/2025