Anais do Simbiotec

AVALIAÇÃO DO ESTEROIDE CARDIOTÔNICO BD-8 NOS NÍVEIS DE CITOCINAS PRÓ-INFLAMATÓRIAS

Publicado em 05/11/2024 - ISBN: 978-65-272-1075-7

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Título do Trabalho
AVALIAÇÃO DO ESTEROIDE CARDIOTÔNICO BD-8 NOS NÍVEIS DE CITOCINAS PRÓ-INFLAMATÓRIAS
Autores
  • Anna Beatriz Araujo Medeiros
  • Mariana Mendonça Soares
  • Davi Azevedo Ferreira
  • Éssia De Almeida Lima
  • Gabriela Carolina Santos Lima de Oliveira
  • Mateus Bernardo Da Silva Leite
  • Matheus Vieira Machado
  • José Augusto Ferreira Perez Villar
  • Leandro Augusto de Oliveira Barbosa
  • SANDRA RODRIGUES MASCARENHAS
Modalidade
Resumo expandido - PÔSTER ou ORAL.
Área temática
VERMELHA - Relacionada à saúde, envolve o desenvolvimento de medicamentos, tratamentos médicos, vacinas, fármacos e manipulações genéticas.
Data de Publicação
05/11/2024
País da Publicação
Brasil
Idioma da Publicação
Português
Página do Trabalho
https://www.even3.com.br/anais/iii-simbiotec-427979/848489-avaliacao-do-esteroide-cardiotonico-bd-8-nos-niveis-de-citocinas-pro-inflamatorias
ISBN
978-65-272-1075-7
Palavras-Chave
Inflamação, Macrófagos, Imunomodulação.
Resumo
Introdução Os esteroides cardiotônicos (ECTs) são compostos orgânicos que, em concentrações terapêuticas, possuem a propriedade de inibir a Na+ /K+ -ATPase. Esses esteroides foram inicialmente identificados e isolados de plantas, como a ouabaína, e da pele e glândula parótida de anfíbios, como a marinobufagina (DVELA et al., 2007; CARVALHO et al., 2019). Posteriormente, esses esteroides foram identificados com produção endógena em mamíferos, onde foram relatados a presença no plasma, suco biliar, glândula adrenal, placenta e urina, sendo o córtex adrenal e o hipotálamo os principais locais de produção dos ECTs endógenos (BAGROV; SHAPIRO; FEDOROVA, 2009). Adicionalmente, foi demonstrado que a secreção desses esteroides é influenciada por mediadores como a angiotensina II, hormônio adrenocorticotrófico, vasopressina e fenilefrina (LAREDO; HAMILTON; HAMLYN, 1995; PAVLOVIC, 2020) Além da função de bomba iônica, um estudo mostrou que a Na+ /K+ -ATPase também atua como receptor, onde os esteroides cardiotônicos se ligam e iniciam uma cascata de sinalização intracelular importante em diferentes vias de transdução de sinal que regulam a ativação, crescimento e proliferação celular (LIU; XIE, 2010; LI; XIE, 2009). A inflamação é uma resposta fisiológica do sistema imune que tem como característica remover estímulos prejudiciais e iniciar o processo de cicatrização ocasionados por fatores como infecção, lesão tecidual, células danificadas e compostos tóxicos (BARTON et al., 2008). Essa resposta envolve várias vias de regulação intracelulares que são ativadas a partir de mediadores inflamatórios como produtos microbianos e citocinas (CHEN et al., 2018), esses mediadores são importantes para o início do um quadro inflamatório através do estímulo à expressão gênica de mais mediadores inflamatórios como as própias citocinas pró-inflamatórias, moléculas de adesão, quimiocinas, enzimas indutíveis e indução de apoptose (HOESEL; SCHMID, 2013; HANADA; YOSHIMURA, 2002). Vários estudos do nosso grupo já demonstraram o efeito dos esteroides cardiotônicos na inflamação. Foi observado que a ouabaína reduziu o número total de células e das citocinas pró-inflamatórias IL-1ß e TNFa (LEITE et al., 2015). Além disso, esse esteroide também reduz a ativação da MAPK p38, CD18 e do fator de transcrição NF-?B (CAVALCANTE SILVA et al., 2021; 19 CAVALCANTE-SILVA et al., 2020; LEITE et al., 2015). Adicionalmente, a ouabaína apresentou atividade anti-inflamatória reduzindo o edema de pata, inibindo a migração celular na inflamação e reduzindo inflamação pulmonar alérgica (DE VASCONCELOS et al., 2011; GALVÃO et al., 2017; GALVÃO et al., 2022). Foi visto também a atividade anti-inflamatória da marinobufagina a partir da redução dos níveis das citocinas pró-inflamatórias IL-1ß, IL-6 e TNF-a, e da migração de células na cavidade peritoneal (CARVALHO et al., 2019). A benzilideno digoxina 8 (BD-8), é um esteroide cardiotônico sintetizado a partir de modificações químicas estruturais da digoxina, onde sua síntese consiste na inclusão do radical éter no anel lactona. Esse esteroide demonstrou uma alta seletividade para a isoforma a2 da Na+ /K+ -ATPase, estimulando sua atividade (PESSÔA et al., 2018), entretanto, estudos são necessários para elucidar seu efeito biológico. Dessa forma, o objetivo desse trabalho foi investigar o possível papel anti-inflamatório da BD-8 na inflamação desencadeada por zimosan em macrófagos peritoneais murinos, investigando o efeito desse esteroide cardiotônico nos níveis das citocinas pró-inflamatórias IL-1ß, IL-6 e TNF-a. Metodologia Para a realização da cultura de macrófagos peritoneais, foram utilizados camundongos Swiss albino fêmeas manuseados conforme o protocolo aprovado pela Comissão de Ética no Uso de Animais (CEUA) da UFPB. Os animais foram previamente estimulados com uma injeção intraperitoneal de tioglicolato (2 mL) a 4%. No quarto dia após esse procedimento, os animais foram eutanasiados por deslocamento cervical e foi realizado o lavado peritoneal, que consiste em uma injeção de 5 mL de meio de cultura gelado na cavidade peritoneal e, em seguida, aspiração com seringa. A suspensão de células obtida a partir da lavagem peritoneal foi centrifugada e as células peritoneais foram semeadas em placas de 96 poços a uma concentração de 2x105 células/poço, incubadas por 2 horas e estimuladas com zimosan na concentração de 0,2 mg/mL e/ou tratadas com o esteroide cardiotônico BD-8 (10 µM, 1 µM, 100 nM, 10 nM e 1 nM). Posteriormente, as células foram incubadas novamente por 24 horas. Após o tempo de 24 horas em cultura celular, os sobrenadantes foram coletados para a dosagem das citocinas pró-inflamatórias IL-1ß, IL-6 e TNF-a através do ensaio imunoenzimático (ELISA) do tipo sanduíche, de acordo com as informações do fabricante (Thermo Fisher Scientific Inc). Inicialmente, as placas de ELISA foram sensibilizadas com os anticorpos de captura anti-IL1ß, anti-IL-6 e anti-TNF-a, diluídos em tampão fosfato pH 6.5 (Coating Buffer 1X) e incubadas overnight a 4°C. Após esse período, as placas foram lavadas com salina tamponada com fosfato (PBS) contendo 0,05% de tween 20 (PBST) e os sítios inespecíficos foram bloqueados com a solução de bloqueio (PBS contendo 10% de SFB) por 1 hora à temperatura ambiente. Novamente, as placas foram lavadas em PBST, foram adicionadas as amostras de sobrenadantes a serem analisadas, após isso, as placas foram incubadas novamente overnight a 4°C e terminado o período de incubação, foram lavadas em PBST e o anticorpo de detecção referente a cada citocina foi adicionado, em seguida as placas foram incubadas por 1 hora à temperatura ambiente. Posteriormente, as placas foram novamente lavadas em PBST, o complexo enzimático avidina-peroxidase (avidin-HRP) foi adicionado e foram incubadas por mais 30 minutos à temperatura ambiente. Após lavagens adicionais, foi adicionada a solução substrato contendo tetrametilbenzidina (TMB) e peróxido de hidrogênio (H2O2) e após 15 minutos essa reação foi interrompida com a solução de parada (ácido fosfórico 1M) e realizada a leitura em leitor de placa a 450 nm. Resultados e discussão Os macrófagos peritoneais estimulados com zimosan apresentaram um aumento significativo dos níveis das citocinas pró-inflamatórias IL-1ß, IL-6 e TNF-a em comparação ao grupo controle. Além disso, foi possível observar que o tratamento com a BD-8 em associação ao zimosan, apenas na concentração de 10 µM, apresentou uma redução (17%) do nível da citocina IL-1ß em comparação ao grupo zimosan. Entretanto, nas demais citocinas, em todas as concentrações estudadas, não houve alteração dos níveis em comparação ao grupo zimosan. Já foi demonstrado pelo nosso grupo, em cultura de macrófagos peritoneais estimulados com zimosan, o tratamento com um outro esteroide cardiotônico, a marinobufagina, também reduziu os níveis da citocina IL-1ß. Além disso, a redução dessa citocina também foi observada in vivo em modelo de peritonite estimulada com zimosan que, similarmente à BD-8, não alterou os níveis de TNF-a (CARVALHO et al., 2018). Adicionalmente, foi descrito pelo grupo, que a ouabaína, outro esteroide cardiotônico, também possui a propriedade de diminuir os níveis de IL-1ß na cavidade peritoneal de camundongos estimulados com zimosan (LEITE et al., 2015). Desse modo, esse trabalho demonstrou o efeito da BD-8 em macrófagos peritoneais murinos no modelo de inflamação in vitro contribuindo para o melhor entendimento do efeito biológico dessa substância. Conclusões Diante da análise dos resultados, pode-se concluir que a BD-8, assim como outros esteroides cardiotônicos, possui um papel imunomodulador da resposta inflamatória in vitro demonstrada pela redução da produção de IL-1ß.
Título do Evento
III Simbiotec
Cidade do Evento
João Pessoa
Título dos Anais do Evento
Anais do Simbiotec
Nome da Editora
Even3
Meio de Divulgação
Meio Digital

Como citar

MEDEIROS, Anna Beatriz Araujo et al.. AVALIAÇÃO DO ESTEROIDE CARDIOTÔNICO BD-8 NOS NÍVEIS DE CITOCINAS PRÓ-INFLAMATÓRIAS.. In: Anais do Simbiotec. Anais...João Pessoa(PB) UFPB, 2024. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/iii-simbiotec-427979/848489-AVALIACAO-DO-ESTEROIDE-CARDIOTONICO-BD-8-NOS-NIVEIS-DE-CITOCINAS-PRO-INFLAMATORIAS. Acesso em: 16/07/2025

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