AVALIAÇÃO DO PAPEL DOS ENDOCANABINOIDES NAS VIAS DE MORTE CELULAR NA RETINA EM DESENVOLVIMENTO

Gabriella Grossi de Lima Dias; Thainá Angel Bernardes Marques Fonseca; Eduardo Cosendey Bockmann; karin da Costa calaza

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Trabalho

DOI

10.29327/fisiopat2023.661772

Título do Trabalho

AVALIAÇÃO DO PAPEL DOS ENDOCANABINOIDES NAS VIAS DE MORTE CELULAR NA RETINA EM DESENVOLVIMENTO

Autores

Gabriella Grossi de Lima Dias
Thainá Angel Bernardes Marques Fonseca
Eduardo Cosendey Bockmann
karin da Costa calaza

Modalidade

Resumo

Área temática

Doenças Neurológicas

Data de Publicação

10/02/2025

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/fisiopat2023/661772-avaliacao-do-papel-dos-endocanabinoides-nas-vias-de-morte-celular-na-retina-em-desenvolvimento

ISBN

978-65-272-1162-4

Palavras-Chave

Neuroproteção, Autofagia, Estresse de Retículo Endoplasmático

Resumo

Introdução: O sistema canabinoide é bem descrito em várias partes do sistema nervoso central, incluindo a retina. A retina é um tecido essencial para a visão, pois é responsável por transduzir o sinal de luz em sinalização neuroquímica, que é transmitida ao cérebro. Já foi demonstrado que a retina expressa os principais componentes do sistema canabinoide, como os endocanabinoides predominantes, 2-araquidonoilglicerol (2-AG) e anandamida (AEA), os receptores metabotrópicos clássicos CB1 e CB2, além das enzimas responsáveis pela degradação (MAGL, FAAH) e síntese (DAGL, NAPE-PLD) desses endocanabinoides. Dados do nosso grupo demonstraram que a inibição da MAGL, responsável pela hidrólise do 2-AG, no desenvolvimento da retina de culturas de embriões de galinha, causa morte celular. No entanto, os mecanismos envolvidos ainda não foram elucidados. Objetivo: Avaliar o envolvimento da autofagia e do estresse do retículo endoplasmático na morte celular induzida pela inibição da enzima MAGL. Metodologia: Culturas mistas primárias de células neuronais e células da glia foram realizadas a partir de embriões de sete dias da espécie Gallus gallus, mantidas em MEM com 5% de soro fetal bovino, 1% de glutamina, 1% de estreptomicina e penicilina. Após 24 horas do cultivo das células (C1), elas foram tratadas com URB602 (50 µM), inibidor da enzima MAGL, diluído em DMSO, e coletadas após 24 horas (C2). Grupos controle foram incubados com 0,05% de DMSO. A técnica de Western Blotting foi utilizada para analisar os níveis de proteínas envolvidas na via da autofagia, utilizando anticorpos anti-Beclin-1 (1:1000, n=6) e anti-LC3A/B (1:1000, n=6), e para a via de estresse do retículo endoplasmático, o anti-fosfo-eif2a (1:1000, n=5) foi utilizado. O tampão de amostra foi usado para extrair as proteínas das amostras, e as membranas de PVDF foram bloqueadas com 5% de leite diluído em TBS - 0,1% de Tween. A a-tubulina (1:100.000) foi utilizada como controle de carregamento. Os dados foram normalizados para o controle e a análise estatística utilizada foi o teste t de amostra única, utilizando o GraphPad Prism 8.0.1 considerando p < 0,05 e média ± erro padrão da média. Resultados: Após vinte e quatro horas de tratamento com URB602, as culturas de células mostraram um aumento significativo nos níveis de LC3A/B (2,504 ± 0,4619, p < 0,0225). Por outro lado, após 24 horas de inibição da MAGL, o nível de Beclin-1 diminuiu significativamente (0,5899 ± 0,1539, p < 0,0446). A análise do efeito de 24 horas de exposição ao URB602 no fosfo-eif2a, como uma abordagem para avaliar o estresse do retículo endoplasmático, mostrou uma tendência de aumento em comparação ao controle (5,032 ± 2,500, p < 0,1821). Conclusão: Após a análise, os resultados mostram uma alteração nos níveis de proteínas na via da autofagia e no estresse do retículo endoplasmático após o tratamento com o inibidor da MAGL, como uma abordagem para aumentar a disponibilidade de endocanabinoides. A partir dos resultados observados, a morte celular induzida por URB602 parece estar relacionada a essas vias. No entanto, o envolvimento da autofagia e do estresse do retículo endoplasmático com a morte celular provocada por URB602 ainda precisa ser confirmado. Além disso, uma análise mais detalhada das proteínas de sinalização envolvidas nesses fenômenos está atualmente em investigação.

Título do Evento: II Congresso de Fisiologia e Patologia
Cidade do Evento: Rio de Janeiro
Título dos Anais do Evento: Anais do Congresso de Fisiologia e Patologia
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital
DOI

Como citar

DIAS, Gabriella Grossi de Lima et al.. AVALIAÇÃO DO PAPEL DOS ENDOCANABINOIDES NAS VIAS DE MORTE CELULAR NA RETINA EM DESENVOLVIMENTO.. In: Anais do Congresso de Fisiologia e Patologia. Anais...Rio de Janeiro(RJ) Fiocruz, 2023. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/fisiopat2023/661772-AVALIACAO-DO-PAPEL-DOS-ENDOCANABINOIDES-NAS-VIAS-DE-MORTE-CELULAR-NA-RETINA-EM-DESENVOLVIMENTO. Acesso em: 08/05/2025