A INFECÇÃO IN VITRO POR LEISHMANIA INFANTUM MODULA A EXPRESSÃO GÊNICA DE NEUTRÓFILOS HUMANOS ATRAVÉS DA METILAÇÃO DO DNA

Juliana de Souza Felix; Mariana Cordeiro Almeida; Valéria Marçal Félix de Lima; Flávia Lombardi Lopes

Título do Trabalho

Autores

Juliana de Souza Felix
Mariana Cordeiro Almeida
Valéria Marçal Félix de Lima
Flávia Lombardi Lopes

Modalidade

Resumo (poster)

Área temática

RNA e transcriptômica

Data de Publicação

11/12/2024

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/epbioinfo2024/997237-a-infeccao-in-vitro-por-leishmania-infantum-modula-a-expressao-genica-de-neutrofilos-humanos-atraves-da-metilacao

ISBN

978-65-272-1024-5

Palavras-Chave

Epigenômica, Leishmaniose Visceral, Metiloma, Transcriptoma

Resumo

Introdução: A leishmaniose é uma zoonose endêmica em mais de 98 países e afeta diversos mamíferos, sendo a manifestação visceral a forma mais grave da doença. Em humanos, a letalidade é crescente, passando de 3,1% em 2000 para 10,7% em 2022. Durante a infecção por Leishmania, o neutrófilo é a primeira célula de defesa recrutada e pode ser utilizado pelo parasito como abrigo transitório, a fim de garantir sua sobrevivência e proliferação no hospedeiro. A maneira como o neutrófilo responderá à infecção depende da expressão de genes relacionados a suas funções efetoras, sendo que estes podem ter sua expressão regulada através de mecanismos epigenéticos, como a metilação do DNA. Entretanto, o impacto da infecção por Leishmania spp. na metilação do DNA de neutrófilos humanos ainda não foi elucidado. Objetivo: Identificar alterações nos padrões de metilação do DNA em neutrófilos humanos infectados in vitro por Leishmania infantum e o impacto na regulação da expressão gênica. Métodos: Neutrófilos isolados a partir do sangue total de voluntários saudáveis (n=5) foram infectados por promastigotas de L. infantum (MOI 5:1) e cultivados por 23 horas a 37 °C em 5% CO2. O RNA total foi extraído e um RNA-Seq conduzido para análise de expressão diferencial. As reads foram trimadas com TrimGalore e alinhadas ao genoma de referência humano GRCh38 utilizando HISAT2. A contagem foi realizada utilizando HTSeq e a expressão diferencial analisada com DESeq2. A partir da extração do DNA, utilizamos RRBS-Seq para análise do metiloma. As reads de baixa qualidade foram trimadas utilizando a ferramenta TrimGalore, o alinhamento ao genoma de referência humano GRCh38 foi realizado utilizando Bismark e a metilação diferencial determinada utilizando a ferramenta DMAP. Consideramos como unidade de análise os fragmentos gerados pela digestão com a enzima MspI. Resultados e discussão: Dos 19.701 fragmentos diferencialmente metilados (DMF), 12 apresentavam diferença de ao menos 20% entre os grupos. No cromossomo 6, um DMF de 56 pares de base contendo 2 sítios CpGs, hipometilado em 3 amostras do grupo infectado (? metilação -0,22; FDR 0,049), está na região intrônica do gene SERPINB9. Interessantemente, esse DMF está próximo a um sítio de ligação CTCF anotado em neutrófilos (ENCODE accession EH38E2440158D), que pode regular a expressão gênica de SERPINB9 mesmo distante da região promotora. De fato, esse gene está menos expresso no grupo infectado (log2FC -0,876, p-valor 0,005). SERPINB9 codifica uma proteína inibidora de serina proteases, um inibidor intracelular da elastase dos neutrófilos. Sabe-se que em camundongos infectados com L. major a secreção de elastase neutrofílica induz a atividade microbicida dos macrófagos. Conclusão: A infecção de neutrófilos humanos por L. infantum reduz a expressão de SERPINB9 associada à metilação do DNA, sugerindo um papel protetivo favorecido pela atividade da elastase neutrofílica.

Título do Evento: Escola Paranaense de Bioinformática
Cidade do Evento: Londrina
Título dos Anais do Evento: Anais da Escola Paranaense de Bioinformática
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

FELIX, Juliana de Souza et al.. A INFECÇÃO IN VITRO POR LEISHMANIA INFANTUM MODULA A EXPRESSÃO GÊNICA DE NEUTRÓFILOS HUMANOS ATRAVÉS DA METILAÇÃO DO DNA.. In: Anais da Escola Paranaense de Bioinformática. Anais...Londrina(PR) UEL, 2024. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/epbioinfo2024/997237-A-INFECCAO-IN-VITRO-POR-LEISHMANIA-INFANTUM-MODULA-A-EXPRESSAO-GENICA-DE-NEUTROFILOS-HUMANOS-ATRAVES-DA-METILACAO. Acesso em: 07/06/2025