IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE CURVULARIA SP. AGENTE CAUSAL DA MANCHA FOLIAR DO MILHO

Eduardo Oliveira Guilherme; Talita Pereira de Souza Ferreira; Dalmarcia de Souza Carlos Mourão

Todos os Trabalhos

Trabalho

Título do Trabalho

IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE CURVULARIA SP. AGENTE CAUSAL DA MANCHA FOLIAR DO MILHO

Autores

Eduardo Oliveira Guilherme
Talita Pereira de Souza Ferreira
Dalmarcia de Souza Carlos Mourão

Modalidade

Resumo

Área temática

Genética / Biologia Molecular / Biotecnologia

Data de Publicação

07/02/2020

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/cvgufg3/237477-identificacao-molecular-de-curvularia-sp-agente-causal-da-mancha-foliar-do-milho

ISBN

978-85-5722-421-6

Palavras-Chave

Zea mays L., Curvularia lunata, DNA, perfil de restrição.

Resumo

Fungos do gênero Curvularia são amplamente distribuídos ao redor do mundo sendo responsáveis por diversas doenças em plantas cultivadas, causando principalmente manchas foliares. A correta identificação das espécies é importante para o conhecimento e manejo das doenças, sendo essas identificações baseadas principalmente em características morfológicas. Entretanto, técnicas moleculares como a amplificação de genes específicos, além de análises do padrão de digestão de regiões ITS (Internal Transcribed Spacer) através de enzimas de restrição, têm contribuído para a identificação e diferenciação genética entre espécies. As regiões ITS dispõem de características interessantes para a identificação dos fungos em nível molecular. Uma delas é utilizando primers complementares a região 18S e 28S de rRNA (Ribosomal Ribonucleic Acid), sendo os primers ITS1 e ITS4 os mais comumente utilizados. O presente estudo teve por objetivo a caracterização molecular do patógeno por meio da amplificação do gene Clg2p (Cochliobolus lunatus), espécie-específico para Curvularia lunata e análise do padrão de restrição do fragmento de DNA (Deoxyribonucleic Acid) amplificado para a região ITS. O experimento foi desenvolvido utilizando as folhas aleatórias de plantas das cultivares BRS 1040, BM2202, Traktor, Attack e milho crioulo apresentando sintomas de mancha de Curvularia. As folhas com manchas da doença foram cortadas em pequenos fragmentos e em seguida passaram por um processo de desinfecção, foram dispostas em meio de cultura batata, dextrose e ágar para posterior isolamento. Na identificação molecular realizou-se a extração de DNA, primeiramente os isolados foram inoculados em meio líquido, posteriormente, o micélio foi separado por filtração à vácuo e macerado na presença de nitrogênio líquido. A extração do DNA foi efetuada pelo método CTAB (Zolan e Pukilla), com modificações. Para a caracterização molecular dos isolados, foram utilizados os primers P1: (5’ ATGGACGAGAACAACAGGATAACGA- 3’) e P2: (5’-CTA CCAGCATTTAAGTTTACTCCAG-3’) baseados na sequência nucleotídica do gene Clg2p. A amplificação da região ITS dos isolados foi feita com os primers universais ITS1 (5’ -TCCGTTGGTGAACCAGCG G-3’) e ITS4 (5’- TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’). Os produtos da amplificação da região ITS dos genes ribossomais foram empregados nas análises do perfil de restrição enzimática. As amostras foram coradas com Blue Green (LGC Biotecnologia) e o perfil de restrição foi visualizado em fotodocumentador. A partir das imagens obtidas, observou-se que todos os isolados apresentaram o mesmo padrão de amplificação, utilizando-se primers específicos (gene Clg2p), com o tamanho esperado (? 966pb), caracterizando, assim, estes isolados como C. lunata. Também se obteve o perfil de amplificação da região ITS, mostrando um fragmento de aproximadamente 700 pb e o controle positivo ? 600 pb. Esse resultado condiz com informações da literatura que mostram uma variação de tamanho de 400 a 900 pb para a região ITS em todas as espécies de fungos estudados. Com isso, determinou-se afiliação taxonômica dos isolados à espécie Curvularia lunata.

Título do Evento: III Curso de Verão em Genética
Cidade do Evento: Goiânia
Título dos Anais do Evento: Anais III Curso de Verão em Genética da Universidade Federal de Goiás
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

GUILHERME, Eduardo Oliveira; FERREIRA, Talita Pereira de Souza; MOURÃO, Dalmarcia de Souza Carlos. IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE CURVULARIA SP. AGENTE CAUSAL DA MANCHA FOLIAR DO MILHO.. In: Anais III Curso de Verão em Genética da Universidade Federal de Goiás. Anais...Goiânia(GO) Universidade Federal de Goiás, 2020. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/cvgufg3/237477-IDENTIFICACAO-MOLECULAR-DE-CURVULARIA-SP-AGENTE-CAUSAL-DA-MANCHA-FOLIAR-DO-MILHO. Acesso em: 24/06/2025