CLONAGEM E EXPRESSÃO DO SISTEMA LAMBDA RED VOLTADO PARA O REPARO DIRECIONADO POR HOMOLOGIA EM ESCHERICHIA COLI UTILIZANDO CRISPR-CAS9

Franklin Ferreira Rezende Neto; Jerusa ARAÚJO  QUINTÃO  ARANTES FARIA

Título do Trabalho

Autores

Franklin Ferreira Rezende Neto
Jerusa ARAÚJO QUINTÃO ARANTES FARIA

Modalidade

Resumo

Área temática

Genética / Biologia Molecular / Biotecnologia

Data de Publicação

07/02/2020

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/cvgufg3/237260-clonagem-e-expressao-do-sistema-lambda-red-voltado-para-o-reparo-direcionado-por-homologia-em-escherichia-coli-ut

ISBN

978-85-5722-421-6

Palavras-Chave

CRISPR-Cas9, Red lambda, edição genética

Resumo

CRISPR-Cas9 é uma técnica revolucionária que permite a edição genética de forma mais precisa e menos custosa quando comparadas com outras técnicas existentes. O mecanismo de edição genética faz uso de duas vias naturais de reparo da célula: junção de pontas não homólogas, non-homologous end joining (NHEJ), utilizada para o nocaute de genes, e reparo direcionado por homologia, homology directed repair (HDR), utilizada majoritariamente para a inserção de novas sequências nucleotídicas no DNA, esta última a via preferencial em procariotos. O presente projeto teve por objetivo o estudo in silico do sistema red lambda, o desenho e clonagem do cassete de expressão de seus genes constituintes, exo, bet gam; a sequência sintetizada quimicamente pela empresa GenOne e, em seguida, o acoplamento do sistema Red à edição genética CRISPR-Cas9. Assim, foi desenhado um cassete de expressão, no qual o operon concebido possui um promotor de transcrição lac modificado, uma sequência de ligação ao ribossomo (RBS) modificada oriunda do fago T7, um terminador de transcrição rho-independente sintético e os sítios de restrição BioBrick, estes últimos flanqueando o operon. Estes sítios de restrição, chamados de prefixos e sufixos servirão para o passo final do projeto, a clonagem do cassete desenhado no plasmídeo pSB1C3, enquanto as outras sequências adicionadas foram escolhidas para a otimização do sistema em Escherichia coli. Após a chegada da síntese, o vetor foi transformado em células competentes, extraído e digerido para análise do tamanho do fragmento. Este estudo consiste em uma parte crucial da construção de um vetor CRISPR/Cas9 único e padronizado no intuito de otimizar e aplicar esta metodologia de edição genética de procariotos.

Título do Evento: III Curso de Verão em Genética
Cidade do Evento: Goiânia
Título dos Anais do Evento: Anais III Curso de Verão em Genética da Universidade Federal de Goiás
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

NETO, Franklin Ferreira Rezende; FARIA, Jerusa ARAÚJO QUINTÃO ARANTES. CLONAGEM E EXPRESSÃO DO SISTEMA LAMBDA RED VOLTADO PARA O REPARO DIRECIONADO POR HOMOLOGIA EM ESCHERICHIA COLI UTILIZANDO CRISPR-CAS9.. In: Anais III Curso de Verão em Genética da Universidade Federal de Goiás. Anais...Goiânia(GO) Universidade Federal de Goiás, 2020. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/cvgufg3/237260-CLONAGEM-E-EXPRESSAO-DO-SISTEMA-LAMBDA-RED-VOLTADO-PARA-O-REPARO-DIRECIONADO-POR-HOMOLOGIA-EM-ESCHERICHIA-COLI-UT. Acesso em: 21/06/2025