EFICIÊNCIA COMPARATIVA DE PROTOCOLOS DE EXTRAÇÃO DE DNA EM BACTÉRIAS GRAM-POSITIVAS E GRAM-NEGATIVAS: IMPLICAÇÕES PARA ENSAIOS DE PCR

Sophia Marques Potz de Oliveira da Costa; Luana de Oliveira Silva; Rebeca Praxedes Nogueira Dantas; Manuela de Jesus Pitta; Maria Rita Dager Costa Vieira; ⁠Mário Tatsuo Makita; Dayanne Araújo de Melo; Theresse Camille Nascimento Holmström; Miliane Moreira Soares de Souza

Título do Trabalho

Autores

Sophia Marques Potz de Oliveira da Costa
Luana de Oliveira Silva
Rebeca Praxedes Nogueira Dantas
Manuela de Jesus Pitta
Maria Rita Dager Costa Vieira
⁠Mário Tatsuo Makita
Dayanne Araújo de Melo
Theresse Camille Nascimento Holmström
Miliane Moreira Soares de Souza

Modalidade

Resumo

Área temática

Ciências Agrárias - Medicina Veterinária

Data de Publicação

27/03/2026

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

pt-BR

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/xii-reuniao-anual-iniciacao-cientifica-da-ufrrj-raic/1326004-eficiencia-comparativa-de-protocolos-de-extracao-de-dna-em-bacterias-gram-positivas-e-gram-negativas--implicacoe

ISBN

978-65-272-2302-3

Palavras-Chave

Extração de DNA; Protocolos ; Gram- positivas; Gram-negativas, PCR

Resumo

A técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) é uma ferramenta indispensável em pesquisas voltadas à identificação bacteriana e à detecção de genes de resistência. Entretanto, para que os resultados da PCR apresentem confiabilidade e reprodutibilidade, a qualidade do DNA extraído constitui um ponto crítico de controle. Dessa forma, a escolha de protocolos de extração adequados é essencial para assegurar o equilíbrio entre custo, praticidade e qualidade das extrações obtidas. O presente estudo teve como objetivo comparar e analisar cinco protocolos de extração de DNA bacteriano, buscando determinar aquele que oferece melhor relação entre custo e qualidade, considerando isolados representativos de bactérias Gram-negativas e Gram-positivas. O grupo de bactérias Gram-negativas foi composto por 10 cepas de Escherichia coli, isoladas de amostras de urina de cães, enquanto o grupo de Gram-positivas incluiu 10 cepas de Staphylococcus pseudintermedius, obtidas a partir do conduto auditivo de cães. Todas as cepas foram previamente caracterizadas fenotipicamente e confirmadas por espectrometria de massas por dessorção/ionização a laser assistida por matriz, associada ao tempo de voo (MALDI-TOF MS). Os protocolos avaliados foram selecionados com base em critérios de custo, eficiência e aplicabilidade, sendo eles: 1)Extração de DNA de bactérias Gram-Positivas;2)Extração de DNA de bactérias Gram-Negativas;3)Extração de DNA de todas as bactérias;4)Extração de DNA com Kit Extracta®️Mdx para Gram-Positivas e 5)Extração de DNA com Kit Extracta®️Mdx para Gram-Negativas. As amostras foram quantificadas no espectrofotômetro Nanodrop 2000. As razões de absorbância em 230,260 e 280nm foram utilizadas para determinação de concentração e pureza dos DNA extraídos.Os ácidos nucleicos apresentam absorbância máxima em 260 nm, enquanto proteína absorvem majoritariamente em 280 nm. Utiliza-se a razão 260/280 como um indicador de pureza do DNA, sendo valores próximos a 1,8 considerados ideais em termos de presença de proteínas. A razão de 260/230 é utilizada como indicador de carboidratos, que podem prejudicar a reação de PCR. Ressalta-se ainda que concentrações excessivas de DNA podem prejudicar a reação, embora não exista uma padronização universal. No protocolo 1, as amostras de Gram-positivas apresentaram concentração média (CM) de 32,15 ng/µL, com alta dispersão dos valores (desvio padrão – DP = 522,63 ng/µL). Já as amostras de Gram-negativas apresentaram CM de 1900,35 ng/µL, com DP de 902,76. Na análise de qualidade, a razão 260/230 apresentou valores inferiores a 1,0. No protocolo 2, as amostras de Gram-positivas apresentaram CM de 615,45 ng/µL (DP = 201,67), enquanto as Gram-negativas obtiveram CM de 1051,87 ng/µL (DP = 286,59). As razões 260/280 foram satisfatórias, próximas ao esperado (2,23 e 1,62, respectivamente), embora os valores de 260/230 tenham permanecido abaixo do ideal. No protocolo 3, as bactérias Gram-negativas apresentaram CM de 241,84 ng/µL (DP = 128,5), e as Gram-positivas, CM de 145,98 ng/µL (DP = 56,2). As razões 260/280 foram de 2,0 e 2,4, e os valores de 260/230 de 1,16 e 1,52, respectivamente, o que indica melhor desempenho em termos de pureza quando comparado aos protocolos anteriores. No protocolo 4, as Gram-negativas apresentaram CM de 201,1 ng/µL (DP = 58,64), com valores de 260/280 de 1,92 e 260/230 de 1,43. Já no protocolo 5, a extração direta a partir de colônias de Gram-negativas resultou em CM de 215,5 ng/µL, razão 260/280 de 1,24 e razão 260/230 de 0,75, indicando maior presença de contaminantes. A análise dos resultados evidencia que a eficiência dos protocolos de extração de DNA é fortemente influenciada pela estrutura da parede celular bacteriana e pelos reagentes empregados. Entre os métodos avaliados, o kit Extracta®Mdx apresentou melhor desempenho em termos de pureza e praticidade, configurando-se como a alternativa mais recomendada para a extração de DNA em diferentes tipos de bactérias a serem submetidas a análises por PCR.

Título do Evento: XII Reunião Anual de Iniciação Científica da UFRRJ (RAIC 2025) & VI Reunião Anual de Iniciação em Desenvolvimento Tecnológico e Inovação (RAIDTec 2025)
Cidade do Evento: Seropédica
Título dos Anais do Evento: Anais da Reunião Anual de Iniciação Científica e Reunião Anual de Iniciação em Desenvolvimento Tecnológico e Inovação da UFRRJ - Justiça climática: por um mundo mais sustentável, justo e igualitário
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

COSTA, Sophia Marques Potz de Oliveira da et al.. EFICIÊNCIA COMPARATIVA DE PROTOCOLOS DE EXTRAÇÃO DE DNA EM BACTÉRIAS GRAM-POSITIVAS E GRAM-NEGATIVAS: IMPLICAÇÕES PARA ENSAIOS DE PCR.. In: Anais da Reunião Anual de Iniciação Científica e Reunião Anual de Iniciação em Desenvolvimento Tecnológico e Inovação da UFRRJ - Justiça climática: por um mundo mais sustentável, justo e igualitário. Anais...Seropédica(RJ) UFRRJ, 2025. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/xii-reuniao-anual-iniciacao-cientifica-da-ufrrj-raic/1326004-EFICIENCIA-COMPARATIVA-DE-PROTOCOLOS-DE-EXTRACAO-DE-DNA-EM-BACTERIAS-GRAM-POSITIVAS-E-GRAM-NEGATIVAS--IMPLICACOE. Acesso em: 30/05/2026