ADAPTAÇÃO DE PROTOCOLO IN PLANTA VISANDO EFICIÊNCIA NA TRANSFORMAÇÃO GENÉTICA DE ARROZ (ORYZA SATIVA L.)

Dandara Verissimo Soprani; Inês Ariane De Paiva Câncio; Leandro Azevedo Santos

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Trabalho

Título do Trabalho

ADAPTAÇÃO DE PROTOCOLO IN PLANTA VISANDO EFICIÊNCIA NA TRANSFORMAÇÃO GENÉTICA DE ARROZ (ORYZA SATIVA L.)

Autores

Dandara Verissimo Soprani
Inês Ariane De Paiva Câncio
Leandro Azevedo Santos

Modalidade

Resumo

Área temática

Ciências Agrárias - Agronomia

Data de Publicação

27/03/2026

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

pt-BR

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/xii-reuniao-anual-iniciacao-cientifica-da-ufrrj-raic/1325909-adaptacao-de-protocolo-in-planta-visando-eficiencia-na-transformacao-genetica-de-arroz-(oryza-sativa-l)

ISBN

978-65-272-2302-3

Palavras-Chave

Protocolo, Biotecnologia, transformação genética

Resumo

As mudanças climáticas têm imposto desafios significativos à agricultura global, afetando diretamente a produtividade e a estabilidade das culturas alimentares. Entre elas, o arroz (Oryza sativa L.) se destaca por ser a base alimentar de mais da metade da população mundial, além de espécie modelo em pesquisas de biotecnologia pelo genoma conhecido, diversidade genética e ciclo curto. Nesse contexto, a transformação genética de plantas surge como estratégia para o desenvolvimento de cultivares mais eficientes e resilientes, contribuindo para a segurança alimentar. Os métodos convencionais in vitro, embora amplamente utilizados, apresentam limitações, como maior tempo para obtenção das plantas e ocorrência de variações somaclonais. Diante disso, este trabalho teve como objetivo adaptar um protocolo in planta para transformação genética em arroz, visando maior eficiência e reprodutibilidade, além de evitar tais limitações. A transformação genética de arroz foi conduzida a partir do Protocolo descrito por Haque et al. (2025), com adaptações específicas. Utilizou-se o vetor pHGWFS7, onde o promotor da actina 2 foi fusionado aos genes repórteres EGFP e GUS. O gene repórter EGFP, permite a visualização da fluorescência verde em células transformadas, e o GUS, confere coloração azul após reação com o substrato X-Gluc, além do gene hptII como marcador de resistência à higromicina. Sementes da cultivar Nipponbare foram desinfetadas com NaOCl, pré-germinadas por 48 h e submetidas à infecção com Agrobacterium tumefaciens cultivada em meio YEB suplementado com antibiótico. As modificações introduzidas no protocolo foram avaliadas em duas etapas. Primeiramente, comparou-se a presença ou ausência de 2,4-D, associada à injúria mecânica das sementes, sem ressuspensão bacteriana em meio CCM. Posteriormente, avaliou-se a inclusão da ressuspensão bacteriana em CCM, variando o número de vácuos aplicados (um ou dois) e os tempos de co-cultivo, sem testar o efeito do 2,4-D nesta fase. No segundo conjunto de testes, a suspensão foi centrifugada (4.800 rpm, 10 min, 20 °C), ressuspendida em meio CCM, ajustada para OD₆₀₀ ≈ 0,2 e suplementada com acetoseringona (1 h) para indução dos genes de virulência. Como modificação ao protocolo original, adicionou-se Silwet L-77 visando aumentar a penetração bacteriana. As sementes foram incubadas por 20 min (120 rpm, 28 °C) e submetidas a vácuo (550 mm Hg, 10 min). Em seguida, uma parte foi distribuída em placas contendo papel filtro e meio CCM, enquanto outro grupo foi mantido sob agitação até OD₆₀₀ ≈ 0,6, submetido a novo vácuo e, então, distribuído em placas, onde permaneceram por 72 horas, à 28° no escuro. Após esse período, as sementes foram lavadas quatro vezes com meio contendo sais minerais e vitaminas, para remover células residuais de Agrobacterium, seguidas de uma última lavagem com Timentin a 200mg/L e transferidas para meio de seleção contendo higromicina a 20mg/L, por 14 dias. Os testes realizados permitiram observar diferenças marcantes entre os tratamentos. No tratamento com 2,4-D, houve ausência de fluorescência e não ocorreu desenvolvimento de plântulas, enquanto no tratamento sem 2,4-D verificou-se fluorescência fraca acompanhada da formação de folhas verdes. Nos ensaios com ressuspensão em meio CCM, um único vácuo (OD₆₀₀ ~0,2) resultou em fluorescência restrita às raízes, enquanto dois vácuos (OD₆₀₀ ~0,6) possibilitaram fluorescência também na parte aérea, sugerindo maior eficiência do processo. Esses resultados indicam que o método apresenta potencial, mas ainda necessita de otimizações quanto ao uso de 2,4-D, tempos de co-cultivo, doses de higromicina e diferentes estirpes bacterianas, etapas que serão exploradas para consolidar um protocolo mais eficiente e reprodutível de transformação genética in planta em arroz.

Título do Evento: XII Reunião Anual de Iniciação Científica da UFRRJ (RAIC 2025) & VI Reunião Anual de Iniciação em Desenvolvimento Tecnológico e Inovação (RAIDTec 2025)
Cidade do Evento: Seropédica
Título dos Anais do Evento: Anais da Reunião Anual de Iniciação Científica e Reunião Anual de Iniciação em Desenvolvimento Tecnológico e Inovação da UFRRJ - Justiça climática: por um mundo mais sustentável, justo e igualitário
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

SOPRANI, Dandara Verissimo; CÂNCIO, Inês Ariane De Paiva; SANTOS, Leandro Azevedo. ADAPTAÇÃO DE PROTOCOLO IN PLANTA VISANDO EFICIÊNCIA NA TRANSFORMAÇÃO GENÉTICA DE ARROZ (ORYZA SATIVA L.).. In: Anais da Reunião Anual de Iniciação Científica e Reunião Anual de Iniciação em Desenvolvimento Tecnológico e Inovação da UFRRJ - Justiça climática: por um mundo mais sustentável, justo e igualitário. Anais...Seropédica(RJ) UFRRJ, 2025. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/xii-reuniao-anual-iniciacao-cientifica-da-ufrrj-raic/1325909-ADAPTACAO-DE-PROTOCOLO-IN-PLANTA-VISANDO-EFICIENCIA-NA-TRANSFORMACAO-GENETICA-DE-ARROZ-(ORYZA-SATIVA-L). Acesso em: 30/05/2026