PADRONIZAÇÃO DE ENSAIOS PARA QUALIFICAÇÃO DE CULTURAS PRIMÁRIAS CELULARES UTILIZADAS EM PRODUTOS DE TERAPIA CELULAR EM DESENVOLVIMENTO NO LMR-UNIFASE

Priscila Grion de Miranda Borchio; Cleonice Gomes de Santana; Maria Eduarda Cordebello Gall; Rosana Bizon Vieira Carias

Título do Trabalho

Autores

Priscila Grion de Miranda Borchio
Cleonice Gomes de Santana
Maria Eduarda Cordebello Gall
Rosana Bizon Vieira Carias

Modalidade

PESQUISAS CIENTÍFICAS - aquelas que são fruto de pesquisa empírica dentro dos parâmetros do método científico.

Área temática

TECNOLOGIAS, GESTÃO E POLÍTICAS PÚBLICAS - Uso inteligente e inovador de conhecimentos e recursos tecnológicos para desenvolver produtos e processos sustentáveis, buscando promover a sustentabilidade ambiental e a preservação da biodiversidade. O reconhecimento e valorização da sabedoria acumulada pelos sistemas biológicos e pelas comunidades tradicionais, aplicado na gestão de projetos, organizações e em políticas públicas, para o benefício da sociedade, desenvolvendo ações, produtos, materiais e sistemas na busca de soluções de problemas socioambientais. Ex: tecnologias sociais, economia circular, tecnologias verdes, biodesign, arquitetura vernacular, biomimética, bioplásticos, biocombustíveis, biofertilizantes, saberes tradicionais aplicados à conservação dos alimentos, etc.

Data de Publicação

19/02/2025

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/scunifasefmp2024/956925-padronizacao-de-ensaios-para-qualificacao-de-culturas-primarias-celulares-utilizadas-em-produtos-de-terapia-celul

ISSN

2675-8563

Palavras-Chave

Padronização de ensaios; Produtos de terapia celular; Medicina regenerativa.

Resumo

Introdução: A área biomédica e biotecnológica, tem sido impulsionada pelo conhecimento tecnocientífico, resultando em descoberta e desenvolvimento terapêutico na medicina regenerativa. Produtos de Terapia avançada (PTA), como terapia celular, terapia gênica e engenharia de tecidos, baseados em cultivo de células in vitro, estão sendo utilizados para prevenir e tratar doenças, visando cura e melhoria da qualidade de vida. As células mesenquimais estromais (MSCs) são amplamente utilizadas, sendo obtidas de tecidos biológicos e podendo ser utilizadas de forma autóloga ou alogênica. O foco na terapia celular destaca seu potencial inovador e as MSCs obtidas de tecido adiposo, em particular, são valorizadas por suas propriedades imunomoduladoras, anti-inflamatórias e capacidade de diferenciação. Além das células MSCs, tem sido descrito na literatura a utilização de células de cartilagem do septo nasal, que são células multipotentes e possuem grande capacidade de se diferenciar para a via condrogênica e osteogênica. Os fibroblastos (HFB) da derme desempenham um papel importante na manutenção da integridade do tecido conjuntivo, e não possuem a capacidade de se diferenciar para as vias condrogênica, adipogênica e osteogênica, por esse motivo são usados como controle negativo dos experimentos. Objetivo: O objetivo deste trabalho é a padronização de ensaios para o estabelecimento de parâmetros qualitativos ou quantitativos de qualidade de MSCs que possuem propósito de uso como PTA. Metodologia: A obtenção das culturas primárias de MSC e fenotipagem seguiram a RDC-ANVISA 836/2023 e as Boas Práticas de Métodos in Vitro nas instalações do Laboratório de Medicina Regenerativa (LMR) da UNIFASE para a realização das metodologias utilizadas na qualificação de células e PTA. Foram realizados ensaios para a padronização de métodos para determinação da quantificação, viabilidade, capacidade proliferativa e estados proliferativo e apoptótico das células; e para a determinação da potência, foram realizados ensaios de diferenciação celular para as linhagens adipogênicas e osteogênicas. As células MSCs (n=7) passaram pelos ensaios de testes microbiológicos para fungos, bactérias e micoplasmas, para garantir a pureza das células utilizadas. Para avaliação de potência, as células foram induzidas para via adipogênica e osteogênica. Para a revelação da indução adipogênica, foi utilizada coloração com Oil Red, o qual possui afinidade por lipídios. O ensaio de indução para via osteogênica, utilizou as colorações para cristais de cálcio com solução de Vermelho de Alizarina e com solução de Von Kossa. Para medidas quantitativas, o corante alizarina red adsorvido na coloração, foi extraído com uso de solução de metanol e ácido acético (1:2) ou DMSO e, em seguida, medido em espectrofotômetro a 450 nm e 405 nm, respectivamente. Para a avaliação da coloração com Von Kossa, foram adquiridas imagens em microscópio óptico invertido EVOS 5000, as quais foram analisadas com uso do software IMAGEJ. Resultados: Até o momento, os ensaios empregados foram considerados qualitativos, com exceção do método de indução à osteogênese, que evoluiu para a geração de dados quantitativos, tanto pela extração do corante (Vermelho de Alizarina), como pela análise das imagens (Von Kossa). Nossos dados demonstram que a coloração com Von Kossa cora de forma mais específica, quando comparada a de Vermelho de Alizarina. A literatura aponta a coloração com Vermelho de Alizarina como sendo a preferencial e como padrão ouro. Nossos ensaios seguem sendo realizados com maior número de amostras, para gerar dados robustos de repetibilidade e reprodutibilidade, para que entre em harmonia com a literatura ou para que seja relatado como discordante. O equipamento BACTEC BD, considerado aprovado pela ANVISA para realização de ensaios alternativos validados, foi utilizado nesta metodologia para a detecção da presença de fungos e bactérias, porém deverá seguir para validação de método para o produto específico de PTA. Conclusão: Tendo em vista que toda metodologia adotada será de grande importância para a comunidade tecnocientífica e que a utilização dessas células é muito demonstrada em ensaios clínicos e pesquisas pré-clínicas, os resultados deste trabalho são promissores em eficácia e segurança. Vale ressaltar, a necessidade de mais estudos para determinar a aplicação ideal em diferentes condições in vitro e aprimorar protocolos de isolamento e expansão das MSCs. O desenvolvimento contínuo e pesquisa são cruciais para elucidar todo o potencial terapêutico dessas células.

Título do Evento: XXX Semana Científica UNIFASE/FMP
Cidade do Evento: Petrópolis
Título dos Anais do Evento: Anais da Semana Científica
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

BORCHIO, Priscila Grion de Miranda et al.. PADRONIZAÇÃO DE ENSAIOS PARA QUALIFICAÇÃO DE CULTURAS PRIMÁRIAS CELULARES UTILIZADAS EM PRODUTOS DE TERAPIA CELULAR EM DESENVOLVIMENTO NO LMR-UNIFASE.. In: Anais da Semana Científica. Anais...Petrópolis(RJ) UNIFASE/FMP, 2024. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/SCUNIFASEFMP2024/956925-PADRONIZACAO-DE-ENSAIOS-PARA-QUALIFICACAO-DE-CULTURAS-PRIMARIAS-CELULARES-UTILIZADAS-EM-PRODUTOS-DE-TERAPIA-CELUL. Acesso em: 07/11/2025