DETERMINAÇÃO DA ESTRUTURA TRIDIMENSIONAL DE UM NANOCORPO POR RESSONÂNCIA MAGNÉTICA NUCLEAR

Publicado em 22/03/2021 - ISBN: 978-65-5941-128-3

Título do Trabalho
DETERMINAÇÃO DA ESTRUTURA TRIDIMENSIONAL DE UM NANOCORPO POR RESSONÂNCIA MAGNÉTICA NUCLEAR
Autores
  • Joaquim Herzog De Oliveira Knox
  • Marcius da da Silva Almeida
  • Claudia Jorge do Nascimento
Modalidade
Resumo apresentação oral padrão
Área temática
Centro de Ciências da Saúde (CCS)/Biologia Estrutural
Data de Publicação
22/03/2021
País da Publicação
Brasil
Idioma da Publicação
Português
Página do Trabalho
https://www.even3.com.br/anais/jgmictac/320262-determinacao-da-estrutura-tridimensional-de-um-nanocorpo-por-ressonancia-magnetica-nuclear
ISBN
978-65-5941-128-3
Palavras-Chave
nanocorpo; RMN; estrutura tridimensional
Resumo
Anticorpos convencionais, conhecidos como IgG, são moléculas heteroméricas compostas por cadeias pesadas (VH) e cadeias leves (VL) [1]. Em adição a estes anticorpos convencionais, encontram-se organismos – como tubarões e camelídeos – com anticorpos que apresentam estruturas e propriedades diferenciadas. Esses anticorpos não convencionais contam apenas com a presença de cadeias pesadas em suas estruturas e podem ser identificados como "VHH" (do inglês, variable heavy homodimers). Os VHH dos camelídeos são conhecidos como nanocorpos [2]. Além disso, há anticorpos alternativos (conhecidos como “Fab”) que poderiam exercer função similar à dos nanocorpos porém, devido à presença de mais de um tipo de domínio, apresentam um tamanho significativamente maior, dificultando sua penetração em tecidos [3] e também sua produção. Anticorpos tradicionais já são uma ferramenta essencial em pesquisa e diagnóstico [3]. Os nanocorpos, por sua vez, apresentam diversas características que atraem cada vez mais pesquisadores, podendo ser utilizados de modo eficiente no combate a diversas doenças. As principais características dos nanocorpos relacionadas ao seu potencial de aplicabilidade incluem o tamanho reduzido (~15kDa), alta solubilidade, especificidade e afinidade elevadas e alto grau de estabilidade química e térmica [2]. Com isso, determinação de suas estruturas tridimensionais, e desenvolvimento de protocolos de expressão eficientes, são fundamentais para estudos de interação destas estruturas com outras moléculas. Neste trabalho um nanocorpo específico para IgG de mamíferos, nomeado “Nano 001”, será expresso e purificado para determinação de sua estrutura tridimensional em solução por Ressonância Magnética Nuclear (RMN). Objetivos (i) Estabelecer um protocolo próprio para a síntese e purificação do nanocorpo “Nano 001”. (ii) Determinar a estrutura tridimensional do nanocorpo "Nano 001" por Ressonância Magnética Nuclear (RMN). Metodologia O plasmídeo utilizado neste trabalho foi o pET-25B. Escherichia coli BL21 (DE3) foram utilizadas para receber o plasmídeo. Testes de expressão foram realizados a fim de encontrar uma condição aprimorada para a produção do nanocorpo. Nestes testes, variou-se a densidade óptica a 600 nm (concentração celular) de indução com IPTG, temperatura e o tempo de expressão. A avaliação dos testes foi realizada através do aparecimento de bandas na massa molecular esperada (~15kDa) em gel SDS-PAGE. Diferentes protocolos de expressão já estabelecidos para a produção de nanocorpos foram utilizados como referência. Referências [1] KHONG, V.; CHEN, N.; SERGE, S. Heavy-chain antibodies in Camelidae?; a case of evolutionary innovation. p. 39–47, 2002. [2] DMITRIEV, O. Y.; LUTSENKO, S.; MUYLDERMANS, S. Nanobodies as Probes for Protein Dynamics in Vitro and in. v. 291, n. 8, p. 3767–3775, 2016. [3] KOCH-NOLTE, F. Nanobodies and Nanobody-Based Human Heavy Chain Antibodies As Antitumor Therapeutics. v. 8, n. November, p. 1–13, 2017.
Título do Evento
XLII Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural (JICTAC 2020 - Edição Especial) - Evento UFRJ
Título dos Anais do Evento
Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural
Nome da Editora
Even3
Meio de Divulgação
Meio Digital

Como citar

KNOX, Joaquim Herzog De Oliveira; ALMEIDA, Marcius da da Silva; NASCIMENTO, Claudia Jorge do. DETERMINAÇÃO DA ESTRUTURA TRIDIMENSIONAL DE UM NANOCORPO POR RESSONÂNCIA MAGNÉTICA NUCLEAR.. In: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural. Anais...Rio de Janeiro(RJ) UFRJ, 2021. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/jgmictac/320262-DETERMINACAO-DA-ESTRUTURA-TRIDIMENSIONAL-DE-UM-NANOCORPO-POR-RESSONANCIA-MAGNETICA-NUCLEAR. Acesso em: 14/02/2025

Trabalho

Even3 Publicacoes