METODOLOGIA DE CULTIVO DE CÉLULAS B DE CENTRO GERMINATIVO PARA ANÁLISE DO REPERTÓRIO DE ESPECIFICIDADES

Publicado em 22/03/2021 - ISBN: 978-65-5941-128-3

Título do Trabalho
METODOLOGIA DE CULTIVO DE CÉLULAS B DE CENTRO GERMINATIVO PARA ANÁLISE DO REPERTÓRIO DE ESPECIFICIDADES
Autores
  • Lucas Tostes Costa Vaz
  • Cecilia Bataglioli Cavazzoni
  • Leda dos Reis Castilho
  • VICTOR ASSIS KERSTEN
  • Heitor A. P. Neto
  • Bruno Maia da Silva Santo
  • André Macedo Vale
Modalidade
Resumo apresentação oral padrão
Área temática
Centro de Ciências da Saúde (CCS)/Imunologia
Data de Publicação
22/03/2021
País da Publicação
Brasil
Idioma da Publicação
Português
Página do Trabalho
https://www.even3.com.br/anais/jgmictac/320108-metodologia-de-cultivo-de-celulas-b-de-centro-germinativo-para-analise-do-repertorio-de-especificidades
ISBN
978-65-5941-128-3
Palavras-Chave
Reperório de Igs; Células B; Imunidade humoral; Especificidade antigênica
Resumo
Durante as respostas imunes contra antígenos vacinais ou patógenos, além de imunoglobulinas (Igs) “específicas” aos antígenos, são geradas Igs de cuja reatividade é indetectável contra os antígenos usados para a imunização ou relacionados aos patógenos, aqui denominadas “inespecíficas”. Contudo, ainda faltam estudos que identifiquem os possíveis ligantes dessas Igs, seja pela caracterização do seu repertório de especificidade ou do seu repertório de genes variáveis. A falta de uma metodologia eficiente de cultivo e expansão de células B estimuladas previamente in vivo, como células B de centros germinativos (B-GC), é um dos fatores que dificulta esses estudos. Nosso grupo desenvolveu um método alternativo para o estudo do repertório de Igs baseado em culturas em diluição limitante (LDA) (Vale et al, 2012). No entanto, ela se limita ao estudo do repertório de células B naïve. No atual trabalho, adaptamos o protocolo para cultivo, expansão e obtenção de Igs secretadas por células B-GC in vitro. Para isso, nós utilizamos como células alimentadoras, fibroblastos 3T3 expressando BAFF (fator de ativação de linfócitos B) e CD40-ligante, um componente fundamental para a reação dos centros germinativos em respostas T-dependentes (células 40LB) (Nojima et al, 2011). Utilizamos células B-GC obtidas de camundongos imunizados com partículas do tipo viral (VLP) de ZIKV na presença de diferentes adjuvantes (alum, LPS, CpG, e R848). Obtivemos com êxito Igs secretadas por células B-GC expandidas em culturas, porém a frequência de clones específicos para o antígeno vacinal, determinada por LDA, foi quase indetectável nos protocolos de imunização primária. Após imunização secundária com VLP, na presença de R848, agonista de TLR7/8 associado a infecções virais, obtivemos um aumento significativo da frequência de clones específicos para VLP. Definimos que o estímulo policlonal com LPS na presença de IL-21 foi mais eficiente para secreção de IgG in vitro, além de refletir a predominância de IgG2a observada in vivo. Observamos que a suplementação contínua com IL-21, nos primeiros dias de cultura, é crucial para aumentar a frequência de clones B-GC secretantes de IgG. Para suprir a necessidade de suplementação com IL21 exógena, obtivemos uma célula alimentadora 40LB transfectada para secretar IL-21 (células NB21) (Kuraoka et al, 2016). Nos resultados, a presença de LPS aumentou a frequência de clones secretantes de IgG utilizando células NB40L, enquanto que nas culturas sobre camada de NB21 o LPS não teve efeito sobre a eficiência de clonagem. Porém, a presença de LPS no protocolo com NB21 parece aumentar a quantidade de IgG secretada por clone respondedor, atingindo uma concentração de IgG até 10x maior ao obtido com NB40L. Essa abordagem já está sendo empregada para correlacionar o repertório de especificidade de anticorpos com o repertório dos genes variáveis de Igs, a fim de caracterizar os anticorpos “específicos” e “inespecíficos” gerados após desafios vacinais. Referências Bibliográficas KURAOKA, Masayuki et al. Complex antigens drive permissive clonal selection in germinal centers. Immunity, v. 44, n. 3, p. 542-552, 2016. NOJIMA, Takuya et al. In-vitro derived germinal centre B cells differentially generate memory B or plasma cells in vivo. Nature communications, v. 2, n. 1, p. 1-11, 2011. VALE, A. M. et al. A rapid and quantitative method for the evaluation of V gene usage, specificities and the clonal size of B cell repertoires. Journal of immunological methods, v. 376, n. 1-2, p. 143-149, 2012.
Título do Evento
XLII Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural (JICTAC 2020 - Edição Especial) - Evento UFRJ
Título dos Anais do Evento
Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural
Nome da Editora
Even3
Meio de Divulgação
Meio Digital

Como citar

VAZ, Lucas Tostes Costa et al.. METODOLOGIA DE CULTIVO DE CÉLULAS B DE CENTRO GERMINATIVO PARA ANÁLISE DO REPERTÓRIO DE ESPECIFICIDADES.. In: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural. Anais...Rio de Janeiro(RJ) UFRJ, 2021. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/jgmictac/320108-METODOLOGIA-DE-CULTIVO-DE-CELULAS-B-DE-CENTRO-GERMINATIVO-PARA-ANALISE-DO-REPERTORIO-DE-ESPECIFICIDADES. Acesso em: 13/02/2025

Trabalho

Even3 Publicacoes