PRODUÇÃO RECOMBINANTE E CARACTERIZAÇÃO ESTRUTURAL DE LUNASINA: CROMATOGRAFIA LÍQUIDA ACOPLADA À ESPECTRÔMETRO DE MASSAS REVELA SUA CAPACIDADE DE DIMERIZAÇÃO POR PONTE DE DISSULFETO

Publicado em 22/03/2021 - ISBN: 978-65-5941-128-3

Título do Trabalho
PRODUÇÃO RECOMBINANTE E CARACTERIZAÇÃO ESTRUTURAL DE LUNASINA: CROMATOGRAFIA LÍQUIDA ACOPLADA À ESPECTRÔMETRO DE MASSAS REVELA SUA CAPACIDADE DE DIMERIZAÇÃO POR PONTE DE DISSULFETO
Autores
  • Larissa Duarte de Araújo Nunes
  • Stephanny Miranda Alves de Souza
  • Yraima
  • Marcius da da Silva Almeida
  • Theo Luiz Ferraz de Souza
Modalidade
Resumo apresentação oral curta
Área temática
Centro de Ciências da Saúde (CCS)/Biotecnologia
Data de Publicação
22/03/2021
País da Publicação
Brasil
Idioma da Publicação
Português
Página do Trabalho
https://www.even3.com.br/anais/jgmictac/319869-producao-recombinante-e-caracterizacao-estrutural-de-lunasina--cromatografia-liquida-acoplada-a-espectrometro-de-
ISBN
978-65-5941-128-3
Palavras-Chave
Biotecnologia, Biologia Estrutural, Câncer, Espectroscopia
Resumo
A Lunasina é um peptídeo de 43 aminoácidos, de origem vegetal, que apresenta atividade preventiva e terapêutica no câncer, conforme já mostrado para diferentes tipos de células, tais como de mama, leucemia, cólon e câncer de pulmão (Hsieh et al, 2018). Visto seu potencial terapêutico, a obtenção da lunasina em altas quantidades e sua caracterização estrutural são essenciais para desenvolvimento biofarmacêutico. O objetivo desse estudo foi elaborar uma nova abordagem para produção da lunasina recombinante a partir da sua expressão em Escherichia coli e realizar sua caracterização estrutural. Para tal, em um vetor pET-25b(+) foram inseridos um gene responsável por codificar a lunasina, adicionado de uma cauda de histidina, do domínio B1 da proteína G de Streptococcus (GB1) e de um sítio de clivagem pela protease TEV (Tobacco etch virus) no seu N-terminal. Após a expressão e purificação por cromatografia de afinidade por íons metálicos imobilizados obtivemos um rendimento de 12,2 mg/L de lunasina com alta pureza e massa molecular esperada, como foi observado por cromatografia líquida acoplada à espectrômetro de massas (LC-MS) e cromatografia por exclusão de tamanho molecular. Os dados de dicroísmo circular, espectroscopia de fluorescência e ressonância magnética nuclear indicam um peptídeo intrinsicamente desordenado, conforme esperado. Já as análises por LC-MS revelaram a presença de uma pequena população de dímeros formados por pontes de dissulfeto. Como conclusão, o método de expressão da lunasina fusionada à GB1 foi eficiente e LC-MS se mostrou uma técnica capaz de separar, identificar e quantificar monômeros reduzidos e oxidados, assim como dímeros com 1 ou 2 pontes de dissulfeto. Por fim, nossa descrição da dimerização da lunasina por ponte de dissulfeto gera implicações na estabilidade de armazenamento e controle de qualidade na indústria biofarmacêutica, assim como pode ter relação com suas diferentes ações em células humanas. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS C.C. Hsieh, C. Martínez-Villaluenga, B.O. de Lumen, B. Hernández-Ledesma, Updating the research on the chemopreventive and therapeutic role of the peptide lunasin, Journal of the Science of Food and Agriculture, 98 (2018) 2070-2079. https://doi.org/10.1002/jsfa.8719
Título do Evento
XLII Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural (JICTAC 2020 - Edição Especial) - Evento UFRJ
Título dos Anais do Evento
Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural
Nome da Editora
Even3
Meio de Divulgação
Meio Digital

Como citar

NUNES, Larissa Duarte de Araújo et al.. PRODUÇÃO RECOMBINANTE E CARACTERIZAÇÃO ESTRUTURAL DE LUNASINA: CROMATOGRAFIA LÍQUIDA ACOPLADA À ESPECTRÔMETRO DE MASSAS REVELA SUA CAPACIDADE DE DIMERIZAÇÃO POR PONTE DE DISSULFETO.. In: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural. Anais...Rio de Janeiro(RJ) UFRJ, 2021. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/jgmictac/319869-PRODUCAO-RECOMBINANTE-E-CARACTERIZACAO-ESTRUTURAL-DE-LUNASINA--CROMATOGRAFIA-LIQUIDA-ACOPLADA-A-ESPECTROMETRO-DE-. Acesso em: 13/02/2025

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