FOSFORILAÇÃO DE GLICOSE EM FRAÇÕES SUBCELULARES DE MÚSCULO ESQUELÉTICO DE ZEBRAFISH (DANIO RERIO)

Gabriel de Almeida Menezes; WAGNER SEIXAS DA SILVA

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Trabalho

Título do Trabalho

FOSFORILAÇÃO DE GLICOSE EM FRAÇÕES SUBCELULARES DE MÚSCULO ESQUELÉTICO DE ZEBRAFISH (DANIO RERIO)

Autores

Gabriel de Almeida Menezes
WAGNER SEIXAS DA SILVA

Modalidade

Resumo apresentação oral padrão

Área temática

Centro de Ciências da Saúde (CCS)/Bioquímica

Data de Publicação

22/03/2021

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/jgmictac/318151-fosforilacao-de-glicose-em-fracoes-subcelulares-de-musculo-esqueletico-de-zebrafish-(danio-rerio)

ISBN

978-65-5941-128-3

Palavras-Chave

hexocinase, mitocôndria, zebrafish

Resumo

O zebrafish (Danio rerio), popularmente conhecido como paulistinha, têm sido amplamente utilizado como modelo animal em diversas pesquisas. Sua presença no meio científico é justificada por sua alta capacidade de reprodução, simples manutenção, transparência do embrião e até mesmo o seu tamanho. Entretanto, este dispõe de uma carência considerável em caracterização bioquímica. Utilizando nossa experiência prévia com o modelo de peixe-dourado (dos Santos et al., 2010), nós buscamos caracterizar a atividade da hexocinase (HK) para, posteriormente, utilizar o animal como modelo de estudo para questões do grupo relacionadas aos processos fisiopatológicos. A HK é uma enzima da via glicolítica que catalisa a fosforilação da glicose utilizando a molécula de ATP, mas outras funções importantes têm sido atribuídas à enzima (da-Silva et al., 2004). Existem quatro isoformas já identificadas de HKs em outros modelos, onde diferem nas suas propriedades catalíticas, regulatórias e na localização subcelular. Nosso objetivo foi caracterizar a atividade enzimática nas diferentes subfrações: homogenato total, citosólica e mitocondrial obtidas por centrifugação diferencial. O tecido escolhido, músculo dorsal do zebrafish, foi homogeneizado no potter utilizando tampão contendo: 10 mM Tris-HCl pH 7,4, 1 mM de EGTA, 1 mM de EDTA e 0,32 M de sacarose. A atividade de HK foi avaliada espectrofotometricamente à 37°C utilizando-se por meio de um ensaio enzimático acoplado à reação da glicose-6-fosfato desidrogenase no comprimento de onda de 340 nm (formação de NADH). O meio de reação utilizado contém 50 mM Tris-HCl pH 7,4; 10 mM MgCl2; 0,5 mM ß-NAD+; 5 mM glicose; 0,5 u/mL glicose-6-fosfato desidrogenase (Leuconostoc mesenteroid). A reação foi iniciada pela adição de ATP, e para garantir que a reação era catalisada pela HK, foram feitos ensaios com/sem ATP para cada fração. Os primeiros experimentos determinaram uma atividade específica de 0,040 ± 0,004 µmoles de NADH/mg de proteína em 30 minutos e uma linearidade na determinação de atividade até 15 µg de proteína no ensaio no homogenato. Posteriormente, identificamos uma atividade específica de 0,037 ± 0,009 e 0,065 ± 0,003 µmoles de NADH/mg de proteína em 30 minutos na fração enriquecida de mitocôndria e na fração citosólica, respectivamente. Nossos revelam que existe uma distribuição da atividade de fosforilação de glicose pela Hexocinase na fração solúvel e particulada (enriquecida em mitocôndria). A separação das frações subcelulares permitiu o enriquecimento da atividade enzimática detectada pelo aumento dos valores de atividade específica. Atualmente buscamos ampliar a caracterização enzimática e, futuramente, avaliar a atividade ao desenvolvimento embrionário do zebrafish. dos Santos, R.S. et al. Characterization of non-cytosolic hexokinase activity in white skeletal muscle from goldfish (Carassius auratus L.) and the effect of cold acclimation. Bioscience Reports, 2010. v. 30, p. 413 - 423. da-Silva, W.S. et al. Mitochondrial bound hexokinase activity as a preventive antioxidant defense: steady-state ADP formation as a regulatory mechanism of membrane potential and reactive oxygen species generation in mitochondria. The Journal of Biological Chemistry, 2004. v. 279, p. 39846 - 39855

Título do Evento: XLII Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural (JICTAC 2020 - Edição Especial) - Evento UFRJ
Título dos Anais do Evento: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

MENEZES, Gabriel de Almeida; SILVA, WAGNER SEIXAS DA. FOSFORILAÇÃO DE GLICOSE EM FRAÇÕES SUBCELULARES DE MÚSCULO ESQUELÉTICO DE ZEBRAFISH (DANIO RERIO).. In: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural. Anais...Rio de Janeiro(RJ) UFRJ, 2021. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/jgmictac/318151-FOSFORILACAO-DE-GLICOSE-EM-FRACOES-SUBCELULARES-DE-MUSCULO-ESQUELETICO-DE-ZEBRAFISH-(DANIO-RERIO). Acesso em: 04/06/2025