CLONAGEM DE UMA SEQUÊNCIA QUIMÉRICA DERIVADA DE LEPTOSPIRA INTERROGANS UTILIZANDO O PADRÃO BIOBRICKS®

Andriele Bonemann Madruga; Jessica Dorneles; Thaís Larré Oliveira; Everton Burlamarque Bettin; Caroline Rizzi

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Trabalho

Título do Trabalho

CLONAGEM DE UMA SEQUÊNCIA QUIMÉRICA DERIVADA DE LEPTOSPIRA INTERROGANS UTILIZANDO O PADRÃO BIOBRICKS®

Autores

Andriele Bonemann Madruga
Jessica Dorneles
Thaís Larré Oliveira
Everton Burlamarque Bettin
Caroline Rizzi

Modalidade

Resumo

Área temática

Genética / Biologia Molecular / Biotecnologia

Data de Publicação

07/02/2020

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/cvgufg3/236118-clonagem-de-uma-sequencia-quimerica-derivada-de-leptospira-interrogans-utilizando-o-padrao-biobricks%ae

ISBN

978-85-5722-421-6

Palavras-Chave

TBDR, Quimera, Leptospirose

Resumo

A leptospirose é uma zoonose causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira. Na superfície externa destas bactérias estão presentes proteínas como LIC10896, LIC10964 e LIC12374 que se destacam por assumir a conformação de barril ß transmembrana. Estas proteínas são preditas como dependentes de TonB (TBDR) e atuam em funções vitais para o patógeno. A conservação desses alvos em diferentes espécies e sua localização são características interessantes para um novo alvo vacinal contra leptospirose, que se faz importante considerando que as vacinas atualmente disponíveis para esta doença apresentam limitações como proteção de curta duração e sorovar-específica. Diante disso, antígenos multiepítopos se tornam promissores objetos de estudo para melhorar a eficácia vacinal contra esta doença. Previamente, nosso grupo construiu plasmídeos compatíveis com o padrão BioBricks®, uma estratégia de clonagem que permite a clonagem de sequências biológicas de maneira padronizada, pela utilização de sequências prefixo e sufixo, contendo sítios para enzimas de restrição, flanqueando os fragmentos alvo. Neste sentido, o presente trabalho objetivou a clonagem de uma sequência quimérica composta por fragmentos dos genes LIC10896, LIC10964 e LIC12374, denominada quimera TBDR, utilizando o padrão BioBricks®. Para isso, a sequência codificadora da quimera foi amplificada por PCR a partir do plasmídeo pAE/TBDR previamente sintetizado, utilizando oligonucleotídeos contendo sítios para as enzimas de restrição EcoRI, XbaI, SpeI e PstI. O produto de PCR foi purificado com o kit GFXTM PCR and Gel Band Purification e visualizado através de eletroforese em gel de agarose 1%. O fragmento amplificado foi digerido com as enzimas de restrição XbaI e PstI e o vetor previamente construído pUP500/PpAN, com as enzimas SpeI e PstI. Posteriormente, a sequência foi inserida no plasmídeo utilizando a enzima T4 DNA ligase. O produto da ligação foi utilizado para trasformar Escherichia coli através de choque térmico. Os clones recombinantes foram cultivados em meio Luria-Bertani líquido e submetidos à extração de plasmídeo com o kit GFXTM Micro Plasmid Prep. A presença do inserto foi confirmada por PCR e digestão conforme descrito anteriormente. Diante das técnicas utilizadas observou-se que a seqüência codificadora da quimera TBDR foi amplificada com o tamanho esperado de 1059 pb. A clonagem da mesma no vetor pUP500/pPAN foi confirmada através da liberação de um fragmento com tamanho de 1226 pb, equivalendo a sequência promotora pAN fusionada à sequência codificadora da quimera TBDR. Dessa forma, pode-se concluir que as técnicas utilizadas demonstraram eficiência para clonagem do inserto, gerando uma construção que passa a conter extremidades compatíveis com o padrão BioBricks®. Futuramente, pretende-se utilizar este plasmídeo construído para transformação de Mycobacterium bovis BCG, a fim de avaliar esta cepa recombinante como vacina vetorizada contra leptospirose.

Título do Evento: III Curso de Verão em Genética
Cidade do Evento: Goiânia
Título dos Anais do Evento: Anais III Curso de Verão em Genética da Universidade Federal de Goiás
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

MADRUGA, Andriele Bonemann et al.. CLONAGEM DE UMA SEQUÊNCIA QUIMÉRICA DERIVADA DE LEPTOSPIRA INTERROGANS UTILIZANDO O PADRÃO BIOBRICKS®.. In: Anais III Curso de Verão em Genética da Universidade Federal de Goiás. Anais...Goiânia(GO) Universidade Federal de Goiás, 2020. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/cvgufg3/236118-CLONAGEM-DE-UMA-SEQUENCIA-QUIMERICA-DERIVADA-DE-LEPTOSPIRA-INTERROGANS-UTILIZANDO-O-PADRAO-BIOBRICKS%ae. Acesso em: 06/06/2025