ISOLAMENTO E ANA´LISE FUNCIONAL DE GENES POR SILENCIAMENTO GE^NICO (RNAI)

Wylcker Silva; Grazielle Celeste Maktura; João Gabriel de Angeli Elston; João Paulo Lourenço Franco Cairo; Prof. Dr. Henrique Marques Barbosa de Souza

Todos os Trabalhos

Trabalho

Título do Trabalho

ISOLAMENTO E ANA´LISE FUNCIONAL DE GENES POR SILENCIAMENTO GE^NICO (RNAI)

Autores

Wylcker Silva
Grazielle Celeste Maktura
João Gabriel de Angeli Elston
João Paulo Lourenço Franco Cairo
Prof. Dr. Henrique Marques Barbosa de Souza

Modalidade

Bolsa Auxílio Social

Área temática

Aprimoramento Técnico – Biológica e Saúde

Data de Publicação

02/03/2021

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/congressosae/311863-isolamento-e-ana%3flise-funcional-de-genes-por-silenciamento-ge%5enico-(rnai)

ISBN

978-65-5941-125-2

Palavras-Chave

dsRNA, Cupim, RNAi, pragas

Resumo

O silenciamento gênico por RNA de interferência (RNAi) é uma ferramenta molecular utilizada principalmente para estudo da função de genes. Atualmente, essa tecnologia tem sido amplamente aplicada como método alternativo para o controle de pragas devido à sua alta especificidade, diminuindo danos em espécies não-alvo como predadores e polinizadores. Dentre as pragas urbanas, os cupins (Insecta: Blattodea [Isoptera]) se destacam. Sua alimentação à base de celulose obtida da madeira gera prejuízos incalculáveis, infestando em torno de 47% da cidade de São Paulo. O objetivo desse projeto é a criação e desenvolvimento de moléculas de RNA fita dupla (dsRNA), com potencial inseticida, a partir da seleção de genes-alvos específicos do cupim, de modo a não ocasionar a morte de organismos não-alvos. Os genes escolhidos estão associados ao processo de digestão e desenvolvimento do cupim, assim o silenciamento destes genes impede suas funções correspondentes e pode resultar em um produto capaz de causar a morte da praga. Cinco genes foram selecionados e inseridos em vetor pET28a. De posse dos vetores o bolsista realizou todas as atividades descritas a seguir. A clonagem dos vetores em Escherichia coli para obtenção de maior massa de gene. Em seguida, foi realizado o processo de confirmação em gel de agarose (1%) e a extração dos genes inseridos no vetor. Os fragmentos foram amplificados utilizando primer Foward T7, sequência já presente no vetor, e o Primer reverse, desenhado com base na sequência do vetor, adicionado de cauda T7 na extremidade 5’. O produto foi purificado com o MinElute® PCR Purification Kit e em seguida, utilizado para a síntese de dsRNA, utilizando o MEGAscript™ T7 Transcription Kit. Todos os padrões de eletroforese obtidos em gel de agarose 1% foram únicos e correspondentes ao tamanho esperado para o amplicon. O produto da síntese de dsRNA foi obtido numa concentração média de 400 ng/µL, mostrando-se íntegros e com tamanho correspondente ao esperado. As moléculas silenciadoras se encontram armazenadas de maneira estável (-80°C) para aplicação nos insetos após a retomada das atividades presenciais. Espera-se como fruto deste trabalho uma nova ferramenta de controle ao cupim, com efeito menos nocivo ao meio ambiente e outras espécies de organismos não-alvo do produto.

Título do Evento: III Congresso de Projetos de Apoio à Permanência de Estudantes de Graduação da Unicamp - PAPE-G
Título dos Anais do Evento: Caderno de Resumos: III Congresso de Projetos de Apoio à Permanência de Estudantes de Graduação da Unicamp - PAPE-G
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

SILVA, Wylcker et al.. ISOLAMENTO E ANA´LISE FUNCIONAL DE GENES POR SILENCIAMENTO GE^NICO (RNAI).. In: Caderno de Resumos: III Congresso de Projetos de Apoio à Permanência de Estudantes de Graduação da Unicamp - PAPE-G. Anais...Campinas(SP) UNICAMP, 2020. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/congressosae/311863-ISOLAMENTO-E-ANA%3fLISE-FUNCIONAL-DE-GENES-POR-SILENCIAMENTO-GE%5eNICO-(RNAI). Acesso em: 02/07/2025