DETECÇÃO MOLECULAR DE REPTARENAVÍRUS EM FEZES DE BOA CONSTRICTOR AMARALI

Josana Kapronezai; Cíntia Yumi Fugiwara; Kalena Barros da Silva; Selma Maria de Almeida Santos; Viviane Fongaro Botosso

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Trabalho

Título do Trabalho

DETECÇÃO MOLECULAR DE REPTARENAVÍRUS EM FEZES DE BOA CONSTRICTOR AMARALI

Autores

Josana Kapronezai
Cíntia Yumi Fugiwara
Kalena Barros da Silva
Selma Maria de Almeida Santos
Viviane Fongaro Botosso

Modalidade

Resumo Científico

Área temática

Diagnóstico Laboratorial em Animais Silvestres e Exóticos

Data de Publicação

25/11/2021

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

pt-BR

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/congressoabravas/391851-deteccao-molecular-de-reptarenavirus-em-fezes-de-boa-constrictor-amarali

ISBN

978-65-5941-428-4

Palavras-Chave

vírus, boídeos, monitoramento

Resumo

A doença do corpúsculo de inclusão (BID), reconhecida desde 1970 em boídeos de cativeiro e recentemente atribuída ao vírus da família Arenaviridae, gênero Reptarenavirus, é uma doença infecciosa progressiva, geralmente fatal e que pode dizimar plantéis inteiros. Assim, no monitoramento sanitário do biotério, foram coletadas amostras para pesquisa de reptarenavírus por PCR e o diagnóstico positivo de uma Boa constrictor amarali foi confirmado por sequenciamento genético. Foi realizada nova coleta de amostras e diante da confirmação dos resultados, o animal foi submetido à eutanásia e necropsia. Considerando a importância do monitoramento sanitário e o estresse associado à contenção e manipulação dos animais na coleta invasiva de amostras, este trabalho foi realizado a fim de verificar a possibilidade de detecção do reptarenavírus nas fezes, bem como sua estabilidade no ambiente. Um segmento da parte final do intestino contendo fezes foi coletado em tubo estéril, livre de DNase e RNase e mantido em gelo até a chegada ao laboratório. Em cabine de segurança biológica o segmento intestinal foi aberto e as fezes foram distribuídas em sete tubos estéreis e livres de DNase e RNase. Um dos tubos foi imediatamente congelado à -80ºC, representado o dia 0 do experimento. Os demais tubos foram mantidos à temperatura ambiente e a cada intervalo (dias 1, 2, 3, 6, 7 e 8) uma das alíquotas foi congelada a -80ºC. Uma alíquota de fezes de Bothrops jararaca, com resultados negativos para reptarenavírus em amostras clínicas foi utilizada como controle negativo. Uma alíquota de água foi utilizada como controle dos reagentes da PCR. A extração dos ácidos nucleicos virais (em duplicata) e a síntese de cDNA foram realizadas utilizando-se os kits MagMAX™ CORE Nucleic Acid Purification Kit e High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems™) respectivamente, de acordo com as instruções do fabricante. Para a reação de PCR foram utilizados o kit Platinum PCR SuperMix Kit (Invitrogen™) e primers específicos (1) em um termociclador Veriti Applied Biosystems. Os produtos amplificados foram identificados por eletroforese em gel de agarose a 1,2%, usando GelRed™ (1:10,000) sob luz UV. Marcadores de peso molecular de 100 mpb foram utilizados para estimar o tamanho dos produtos. A amplificação do fragmento de 821 pb ocorreu em todas as alíquotas testadas (dias 0, 1, 2, 3, 6, 7 e 8). Nos controles negativos (água e fezes de Bothrops jararaca) não houve amplificação. Os resultados obtidos demonstram que o reptarenavírus é eliminado nas fezes, sendo possível sua detecção em material mantido à temperatura ambiente por até 8 dias. Esse achado tem grande importância para o manejo e para o monitoramento sanitário dos biotérios. Estudos complementares relativos à viabilidade dos vírus encontrados nas fezes são imprescindíveis para determinar a epidemiologia do patógeno. Referência bibliográfica: 1- Noordin M.M., et al. In vitro isolation and molecular identification of reptarenavirus in Malaysia. Virus Genes; 2016; 52:640–650. Financiamento FAPESP Projeto 2019/12303-4.

Título do Evento: XXIX Encontro e XXIII Congresso ABRAVAS
Título dos Anais do Evento: Anais do XXIX Encontro e XXIII Congresso da Associação Brasileira de Veterinários de Animais Selvagens - ABRAVAS
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

KAPRONEZAI, Josana et al.. DETECÇÃO MOLECULAR DE REPTARENAVÍRUS EM FEZES DE BOA CONSTRICTOR AMARALI.. In: Anais do XXIX Encontro e XXIII Congresso da Associação Brasileira de Veterinários de Animais Selvagens - ABRAVAS. Anais...Sâo Paulo(SP) Online, 2021. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/congressoabravas/391851-DETECCAO-MOLECULAR-DE-REPTARENAVIRUS-EM-FEZES-DE-BOA-CONSTRICTOR-AMARALI. Acesso em: 21/04/2026