ANÁLISE COMPARATIVA DE DIFERENTES MÉTODOS DE EXTRAÇÃO DE RNA DO INTESTINO DE FÊMEAS INGURGITADAS DE RHIPICEPHALUS MICROPLUS

Liris Raphaella Turin de Morais Maki; Thalita Débora Hibner Silva Bureli; Emily Mesquita da Silva; Vinícius Teixeira De Souza; Thaís Almeida Corrêa; Joana da Rocha Matos; VIT?RIA BORIO; Vânia Rita Elias Pinheiro Bittencourt; Isabele da Costa Angelo; Patricia Golo

Título do Trabalho

Autores

Liris Raphaella Turin de Morais Maki
Thalita Débora Hibner Silva Bureli
Emily Mesquita da Silva
Vinícius Teixeira De Souza
Thaís Almeida Corrêa
Joana da Rocha Matos
VIT?RIA BORIO
Vânia Rita Elias Pinheiro Bittencourt
Isabele da Costa Angelo
Patricia Golo

Modalidade

Resumo

Área temática

Entomologia e acarologia

Data de Publicação

24/09/2026

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

pt-BR

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/23-congresso-brasileiro-de-parasitologia-veterinaria-673729/1529294-analise-comparativa-de-diferentes-metodos-de-extracao-de-rna-do-intestino-de-femeas-ingurgitadas-de-rhipicephalu

ISBN

978-65-272-2733-5

Palavras-Chave

biologia molecular, carrapatos, controle biológico

Resumo

Rhipicephalus microplus, é um artrópode com hábitos hematófagos que causa grandes perdas à pecuária brasileira. Diante desse cenário, estudos envolvendo esse parasito são essenciais para descobertas de novas medidas de controle. No presente estudo, comparou-se três diferentes metodologias de extração de RNA, com o objetivo de otimização da prática, tornando-a mais acessível diante dos altos valores agregados a prática, visando maior rendimento e qualidade do material genético. Fêmeas ingurgitadas de R. microplus foram obtidas através de infestações artificiais e, posteriormente, dissecadas. Seus intestinos foram submersos em RNA later e armazenados em freezer -80°C para conservação do material para posteriores extrações. No protocolo A, o intestino foi macerado com pistilo seguido de homogeneização em vórtex, essa técnica foi repetida duas vezes para rompimento das células. Em seguida, utilizou-se kit comercial Qiagen® de acordo com o protocolo estabelecido pelo fabricante. No protocolo B, utilizou-se Trizol® para lise química, a maceração seguiu como no protocolo A, seguido de decantação em centrífuga refrigerada a 4°C (CR), adicionando-se 80µL de clorofórmio e a amostra foi homogeneizada em vórtex. O conteúdo foi novamente levado à CR e o sobrenadante foi transferido para microtubo contendo 200µL de isopropanol, homogenizado em vórtex e repousado em gelo por 30 minutos. Em seguida, a amostra foi levada à CR e o pellet resultante do processo foi lavado em etanol 70% e eluído em 20µL de água livre de RNAse. Já o protocolo C, seguiu o mesmo processo do protocolo B, mas acrescido de duas etapas de clorofórmio e três lavagens com etanol 70%. O RNA extraído foi quantificado em espectofotômetro Nanodrop® seguido de eletroforese a 180V por 16 minutos em gel de agarose 1% para avaliação de integridade do material e visualizado em luz ultravioleta. A quantificação por espectrofotometria (Nanodrop®) revelou concentrações médias de RNA de 394,7±202,6 ng/µL para o grupo A; 1026±1131 ng/µL para o grupo B; 424,3±208,4 ng/µL para o grupo C. Quanto à pureza das amostras, as razões A260/A280 foram 2,204 (A), 1,872 (B) e 1,992 (C), enquanto as razões A260/A230 foram 1,832, 0,833 e 2,330, respectivamente. Baseado nestes parâmetros, o grupo que obteve os melhores resultados em relação a pureza e concentração de RNA foi o grupo C. Apesar do protocolo exigir mais etapas de precipitação e lavagem de RNA, aumentando o tempo de extração, trata-se se uma metodologia que exige menor recurso financeiro, devido à ausência de kits comerciais, que aumentam o valor da extração.

Título do Evento: 23º Congresso Brasileiro de Parasitologia Veterinária
Cidade do Evento: Belo Horizonte
Título dos Anais do Evento: Anais do XXIII Congresso Brasileiro de Parasitologia Veterinária
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

MAKI, Liris Raphaella Turin de Morais et al.. ANÁLISE COMPARATIVA DE DIFERENTES MÉTODOS DE EXTRAÇÃO DE RNA DO INTESTINO DE FÊMEAS INGURGITADAS DE RHIPICEPHALUS MICROPLUS.. In: Anais do XXIII Congresso Brasileiro de Parasitologia Veterinária. Anais...Belo Horizonte(MG) Centro de Atividades Didáticas I (CAD 1) da Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG), 2026. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/23-congresso-brasileiro-de-parasitologia-veterinaria-673729/1529294-ANALISE-COMPARATIVA-DE-DIFERENTES-METODOS-DE-EXTRACAO-DE-RNA-DO-INTESTINO-DE-FEMEAS-INGURGITADAS-DE-RHIPICEPHALU. Acesso em: 28/09/2026